雞IFIT5基因的克隆、表達及其抗病毒功能研究.pdf

1、IFIT家族是一類主要受干擾素、病毒和脂多糖誘導表達的干擾素誘導基因。其編碼的蛋白可通過抑制翻譯起始，識別、結合并隱退特定類型的病毒核酸或蛋白以及參與調節(jié)細胞固有的和非固有的免疫反應等方式來抵抗病毒的入侵。然而，目前該家族基因在禽類上的研究甚少。本研究首先通過分子克隆的方法獲取了雞IFIT5基因CDS區(qū)全長序列，并對其相關分子生物信息進行了分析與預測。其次，采用qRT-PCR技術構建了雞IFIT5基因的組織表達譜，并在機體和細胞水平上檢

2、測了雞IFIT5基因對不同毒力新城疫病毒毒株和不同誘導刺激物的免疫應答差異。最后，在細胞水平上采用siRNA干擾和外源過表達技術初步探究了雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3對IFIT5基因的表達調控作用以及雞IFIT5基因對IRF-3和NF-κB信號通路的影響。取得的主要結果如下:
　　(1)雞IFIT5基因CDS區(qū)全序列長1440bp，由兩個外顯子組成，共可編碼479個氨基酸。其推導氨基酸序列與鳥類對應序列的相似度均

3、不超過70％，與哺乳動物對應序列的相似度均不超過50％。
　　(2)雞IFIT5基因在脾、心、肺、胸腺、腎和小腸組織中具有相對較高的mRNA表達豐度，在法氏囊、腦、胸肌和腿肌組織中具有相對較低的mRNA表達豐度，而在肝臟組織中幾乎不表達。
　　(3)雞IFIT5基因在兩攻毒組雞只的胸腺和脾臟組織中的表達量變化均呈先上升后下降的趨勢且在第二天達到峰值，在Mukteswar攻毒雞只的法氏囊組織中呈先上升后下降的趨勢且在第一天達到

4、峰值，在F48E9攻毒雞只的法氏囊組織中則呈持續(xù)上升趨勢。
　　(4)雞IFIT5和IFN-β基因在轉染poly I∶C和poly dA∶dT4 h后表達水平顯著上調。
　　(5)雞IFIT5和IFN-β基因在感染Mukteswar毒株后存在明顯協(xié)同表達關系，且在8h后的二次感染過程中雞IFIT5基因的表達量相對于IFN-β基因呈現(xiàn)出明顯的延后上調。
　　(6)過表達雞MDA-5、MAVS和IRF-3基因可顯著增強雞I

5、FIT5基因的免疫應答水平，而干擾雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因可顯著抑制雞IFIT5基因的免疫應答水平。
　　(7)過表達雞IFIT5基因可顯著增強IRF-3和NF-κB應答基因的免疫應答水平。
　　上述結果表明:雞IFIT5基因在非刺激狀態(tài)下的表達分布具有明顯的組織特異性，在受到RNA病毒或DNA病毒刺激時表達量會明顯上調，且其表達水平會受到雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3蛋白的調控。此