油菜角果開(kāi)裂相關(guān)基因的預(yù)測(cè)及其功能的初步鑒定.pdf

1、油菜角果開(kāi)裂給油菜的生產(chǎn)帶來(lái)了許多不利的影響，徹底弄清角果開(kāi)裂過(guò)程及其潛在的遺傳調(diào)節(jié)機(jī)制能為油菜抗裂角品種的培育及挑選提供新的途徑。前期對(duì)模式植物擬南芥的研究，鑒定出幾個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子通過(guò)調(diào)節(jié)裂區(qū)不同細(xì)胞形態(tài)的分化形成參與了擬南芥角果的開(kāi)裂過(guò)程。這幾個(gè)轉(zhuǎn)錄因子分別是：FRUITFULL(FUL)、SHATTERPROOF1(SHP1)、SHATFERPROOF2(SHP2)、INDEHISCENT(IND)、ALCATRAZ(ALC)。<

2、br>　　 為了尋找油菜中以上幾個(gè)基因的同源基因，本文運(yùn)用BLAST手段在油菜cDNA庫(kù)中搜尋到與這幾個(gè)基因相似性比較高的一些EST序列和cDNA序列。通過(guò)拼接、克隆以及RACE方法，獲得了幾條與FUL、SHP1、SHP2、IND和ALC基因序列同源性比較高的cDNA序列，一個(gè)為已知基因BnSHP1，其它的暫命名為甘藍(lán)型油菜的候選基因BnFUL-a、BnFUL-b、BnFUL-c、BnFUL-d、BnSHP2、BnIND和BnALC。

3、
　　 RT-PCR結(jié)果顯示，BnFUL-b、BnALC、BnSHP2和BnSHP1基因在花和角果中都有顯著的表達(dá)，此外，BnFUL-b、BnALC、BnSHP2還在其它部位有表達(dá)。Southern雜交技術(shù)鑒定了BnSHP2基因在甘藍(lán)型油菜基因組中至少存在兩個(gè)拷貝。
　　 為了鑒定這幾個(gè)預(yù)測(cè)基因的功能，本文構(gòu)建了BnFUL-b基因的過(guò)量表達(dá)載體和BnALC基因的抑制表達(dá)載體，然后通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜，通過(guò)PCR鑒