鹽脅迫下大頭典竹差異蛋白組學的研究.pdf

1、高鹽濃度的土壤不利于大多植被的生長，而大頭典竹作為我國東南沿海成功引種的樹種之一，在當地表現出較強的適應性，研究其耐鹽機制尤為重要。以2年生的大頭典竹為試驗材料，對盆栽的大頭典竹進行正常的澆水處理和濃度為0.4％、0.6%的NaCl鹽溶液處理。試驗經優(yōu)化后的大頭典竹雙向電泳技術，獲得鹽脅迫前后蛋白差異表達譜，質譜鑒定確定差異蛋白的信息功能，為充分認識植物的耐鹽機制提供理論基礎。
　　本研究主要內容包括：⑴試驗比對了TCA丙酮法、T

2、ris-酚抽法、三氯乙酸-丙酮法與酚抽結合法三種不同蛋白提取方法的凝膠圖譜效果，同時還從膠條水化運行方式、等點聚焦程序(IEF)參數設置、蛋白上樣量幾個方面進行優(yōu)化，獲得適用于大頭典竹的雙向電泳體系：采用三氯乙酸-丙酮法與酚抽結合法提取葉片蛋白，17 cm pH5-8 IPG膠條在等電聚焦程序參數為65000 VH條件下，采用膠面向上、被動水化24 h的運行方式，蛋白上樣量為50μL，獲得的凝膠圖譜重復性好，分辨率高。⑵利用優(yōu)化后的適合

3、大頭典竹的雙向電泳體系，獲得鹽脅迫前后的凝膠圖譜蛋白點均為600個左右。經PDQuest8.0.1蛋白軟件分析，獲得在統(tǒng)計學上具有意義的差異蛋白點。在0.4%鹽濃度脅迫下，得到34個顯著的差異蛋白（12個蛋白上調，22個蛋白下調）。在0.6%鹽濃度脅迫下，得到的差異蛋白有40個。⑶共挑選18個差異的蛋白質譜鑒定分析，成功鑒定15個。其中，在0.4%和0.6%鹽濃度脅迫下，放氧增強子蛋白1、放氧增強子蛋白3、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶、

4、磷酸甘油酸激酶的表達量隨著鹽濃度的升高而增加。谷氨酰胺合成酶、抗壞血酸過氧化物酶2的表達量均表現上調。ATP合酶β亞基、ATP合酶的表達量均表現顯著下調，ATP合酶α亞基表達量呈現先上調后下調的趨勢。⑷對15個差異蛋白進行GO（Gene Ontology）注釋和KEGG分析，大多數差異蛋白位于細胞部位，主要參與了細胞過程和代謝過程，以離子結合功能、轉運活性功能、催化活性功能為主。其主要涉及到光合作用代謝通路（4個），氧化磷酸化代謝通路（