大黃素對(duì)腹腔感染大鼠血漿白蛋白及細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的影響.pdf

1、目的與背景：腹腔感染是外科的常見疾病。在普外科，嚴(yán)重的腹腔感染是引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)或膿毒癥的常見原因，一旦發(fā)生，治療非常困難，大大增加了病人的死亡率。在美國每年有750000人罹患嚴(yán)重的膿毒癥，其死亡率接近30％。目前比較一致的看法是：SIRS是由感染性或非感染性因素引起的機(jī)體持續(xù)過度的炎癥反應(yīng)，包括細(xì)胞因子和其他多種炎性介質(zhì)的大量釋放，以及隨后的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，其中細(xì)胞因子尤其受到關(guān)注。10多年來，國內(nèi)外的學(xué)者試圖在炎癥

2、反應(yīng)的各個(gè)階段進(jìn)行阻斷，以期預(yù)防和治療SIRS，然而臨床試驗(yàn)的效果并不理想。 大黃屬蓼科草本植物，是傳統(tǒng)中草藥，臨床應(yīng)用已有數(shù)千年歷史，具有瀉下攻積，清熱解毒，涼血行瘀之功效。其主要成分有蒽醌類，大黃多糖，大黃鞣質(zhì)等。大黃被認(rèn)為在治療SIRS及多器官功能不全綜合征(MODS)等方面有明顯效果。大黃素屬于大黃蒽醌類，作為中藥大黃的主要成分，其抗炎作用也受到重視。在對(duì)與SIRS關(guān)系密切的急性胰腺炎的研究中，劉瑞林等通過動(dòng)態(tài)觀察大黃素

3、對(duì)急性重癥胰腺炎腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)的作用得出結(jié)論，大黃素可以明顯抑制細(xì)胞因子的釋放并減輕急性重癥胰腺炎的炎癥反應(yīng)。但大黃素對(duì)腹腔感染及其所致膿毒癥的影響未見報(bào)道。 本動(dòng)物研究根據(jù)大黃素的藥理作用特點(diǎn)，采用隨機(jī)對(duì)照方法，通過靜脈注射給藥的方式，比較大黃素作用下大鼠血漿白蛋白、TNF-α、IL-6及大鼠腸粘膜病理評(píng)分等改變，觀察大黃素對(duì)腹腔感染動(dòng)物模型的保護(hù)和治療作用，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。

4、 材料與方法：1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理健康、性成熟的Sprague-Dawley(S-D)大鼠90只，體重180-230g，雄性。大鼠由浙江中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，于該中心以清潔級(jí)喂養(yǎng)，投喂標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)大鼠全價(jià)顆粒飼料，自由飲水，采用架式籠養(yǎng)，房內(nèi)具空調(diào)以保持室內(nèi)溫度，集中通風(fēng)。 90只大鼠術(shù)前隨機(jī)分為三組(A、B和C組)，每組30只。所有動(dòng)物術(shù)前12小時(shí)禁食不禁水，3％戊巴比妥鈉溶液按45mg/kg體重腹腔注射麻醉后，固定，腹部備皮消

5、毒，鋪無菌孔巾，沿腹正中線作2cm切口，暴露盲腸。其中B、C兩組用絲線結(jié)扎三分之一盲腸，避免腸梗阻，用18號(hào)針頭穿刺并擠出少量腸內(nèi)容物造成腹腔感染。將盲腸放回腹腔，縫合腹部切口。A組不作盲腸結(jié)扎和穿刺，其余步驟同B、C兩組。術(shù)后大鼠自由進(jìn)食。 A組為假手術(shù)組；B組為大黃素治療組，術(shù)后即刻以大黃素10mg/kg用注射用水稀釋成2ml尾靜脈注射，其后每12h重復(fù)一次；C組為盲腸結(jié)扎穿刺(CLP)對(duì)照組，術(shù)后即刻以注射用水2ml尾靜脈

6、注射，其后每12h重復(fù)注射一次。 2、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本及取材每組分別于術(shù)后12h、24h、36h(每時(shí)點(diǎn)10只)，3％戊巴比妥鈉溶液腹腔注射麻醉，固定，開腹，取下腔靜脈血后處死，取空腸段約1cm。大鼠血液靜置30min后以3000rpm/min離心10min，取血漿-70℃保存?？漳c組織以10％甲醛固定液固定。 3、實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)及測(cè)定1)實(shí)驗(yàn)中常規(guī)觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、進(jìn)食、大便等情況。 2)血漿白蛋白測(cè)定：

7、采用溴甲酚綠法(BCG)自動(dòng)分析測(cè)定血漿白蛋白含量。 3)血漿TNF-α測(cè)定：取血漿標(biāo)本100μl，按TNF-α放射免疫分析測(cè)定盒的要求測(cè)定血漿TNF-α含量。 4)血漿IL-6測(cè)定：取血漿標(biāo)本100μl，按IL-6放射免疫分析測(cè)定盒的要求測(cè)定血漿IL-6含量。5)病理組織學(xué)檢查：取大鼠空腸標(biāo)本，10％甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色后用普通光學(xué)顯微鏡觀察，并進(jìn)行腸粘膜炎癥損傷病理評(píng)分。 6)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SP

8、SS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包，數(shù)值變量用-x±S表示，先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)。若方差齊，則組間兩兩比較采用Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)。若方差不齊，則通過變量變換使方差齊，再按上述方法進(jìn)行檢驗(yàn)。分類變量采用KruskalWallis檢驗(yàn)。 結(jié)果：1、一般情況：實(shí)驗(yàn)過程中90只大鼠均存活。假手術(shù)組大鼠精神狀態(tài)好，食欲佳，活動(dòng)正常，大便正常。盲腸結(jié)扎穿刺大鼠手術(shù)后大多數(shù)出現(xiàn)精神萎靡、活動(dòng)減少和食欲減退的情況，有逐漸加重趨勢(shì)。大

9、黃素治療組大鼠多數(shù)有排軟便或稀便現(xiàn)象。CLP對(duì)照組大鼠則大便較少或有腹瀉，少數(shù)大鼠有排淡黃色果凍樣便現(xiàn)象。 2、血漿白蛋白的變化：CLP后36h大黃素治療組高于CLP對(duì)照組(P＜0.05)。 3、血漿TNF-α的變化：CLP后12h大黃素治療組低于CLP對(duì)照組(P＜0.05)。24h大黃素治療組低于CLP對(duì)照組(P＜0.05)。36h大黃素治療組明顯低于CLP對(duì)照組(P＜0.01)。 4、血漿IL-6的變化：CL

10、P后24h大黃素治療組低于CLP對(duì)照組(P＜0.05)。36h大黃素治療組低于CLP對(duì)照組(P＜0.05)。 5、大體標(biāo)本觀察：在各時(shí)點(diǎn)處死動(dòng)物后，假手術(shù)組見腹腔正常；大黃素治療組及CLP對(duì)照組剖腹見腹腔有血性或膿性滲出液，帶惡臭，腸管脹氣，內(nèi)臟充血水腫失去原有光澤，手術(shù)后逐漸加重。 6、病理學(xué)觀察：假手術(shù)組各時(shí)點(diǎn)腸粘膜正?；蜉p度水腫、充血。CLP后12h光鏡下見大黃素治療組腸粘膜輕度水腫，上皮下血管充血，CLP對(duì)照組腸

11、上皮下間隙擴(kuò)大，部分上皮與固有層分離，三組間差異有顯著性(P＜0.01)；24h大黃素治療組腸上皮下間隙擴(kuò)大明顯，上皮與固有層分離，CLP對(duì)照組腸粘膜上皮剝脫，部分絨毛尖端剝落；36h大黃素治療組腸粘膜上皮與固有層分離部分上皮剝脫，CLP對(duì)照組小腸絨毛剝落，固有層及擴(kuò)張血管顯露，24h、36h三組間差異有顯著性(P＜0.01)，三組間兩兩比較差異有顯著性(P＜0.017)。 結(jié)論：以大黃素靜脈注射治療腹腔感染所致膿毒癥大鼠，能提