BMSC聯(lián)全pcDNA6-IL-12質粒對小鼠乳腺癌治療作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:制備小鼠骨髓間充質干細胞(BMSC),觀察其在體外對小鼠乳腺癌細胞(EMT-6)生長、凋亡及致瘤性的影響;將BMSC聯(lián)合白細胞介素-12真核表達質粒(pcDNA6/IL-12)于乳腺癌荷瘤小鼠瘤體內共同注射,探討二者聯(lián)合應用對荷瘤小鼠的治療作用。
  方法:(1)小鼠BMSC的原代培養(yǎng)及其鑒定:采用差速全骨髓貼壁法培養(yǎng)原代小鼠BMSC,采用形態(tài)學和成骨誘導茜素紅染色鈣結節(jié)法對其鑒定。(2)制備BMSC條件培養(yǎng)基,分別配置成(

2、25%,50%,75%,100%)四種不同濃度。作用EMT-6細胞24,48,72 h后,CCK-8法檢測在不同濃度BMSC條件培養(yǎng)基的作用下,EMT-6細胞增殖的情況;流式細胞術(Annexin V-FITC/7-AAD雙染色法)檢測在BMSC條件培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下EMT-6細胞凋亡的情況。(3) BMSC條件培養(yǎng)基處理過的EMT-6細胞接種昆明種小鼠,于第4、6、8、10、12、14、16 d測量腫瘤的大小。第17 d處死小鼠,取出小

3、鼠腫瘤并稱重,將腫瘤組織制作成石蠟切片,用蘇木精-伊紅(HE)染色及病理學觀察。(4)建立小鼠乳腺癌荷瘤模型,待腫瘤直徑達到5-8 mm(約4d)將小鼠隨機分為4組。分別為陰性對照組(瘤內注射PBS);BMSC組(瘤內注射BMSC);IL-12組(瘤內注射pcDNA6/IL-12質粒);BMSC聯(lián)合IL-12組(瘤內注射BMSC和pcDNA6/IL-12質粒)。觀察小鼠腫瘤的生長情況,每隔兩天測量腫瘤的長短徑,計算腫瘤的大小。第17d處

4、死小鼠,無菌條件下剝取瘤體和脾臟并稱質量,計算脾指數和抑瘤率。MTT法檢測脾淋巴細胞的增殖活性,LDH法檢測脾淋巴細胞的殺傷活性,HE染色觀察腫瘤組織的病理學改變。
  結果:(1)成功培養(yǎng)小鼠BMSC,取P3代細胞進行成骨誘導,茜素紅染色鈣結節(jié)為陽性。(2)隨著BMSC條件培養(yǎng)基濃度的升高以及作用時間的延長,EMT-6細胞的增殖抑制率由(6.8±0.02)%上升到(29.8±0.05)%,凋亡率由(2.3±0.2)%上升到(25

5、.4±0.3)%。(3) BMSC條件培養(yǎng)基處理的EMT-6細胞致瘤性明顯減弱,腫瘤的體積明顯變小(P<0.05)。組織病理學觀察可見實驗組腫瘤組織大片壞死。(4) BMSC單獨應用及其與pcDNA6/IL-12聯(lián)合應用可導致荷瘤小鼠腫瘤的體積縮小(P<0.01),脾淋巴細胞增生反應及殺傷活性增強(P<0.05)。腫瘤壞死區(qū)擴大并且有大量炎性細胞浸潤。結果顯示BMSC聯(lián)合pcDNA6/IL-12應用可顯著提高實驗小鼠抗腫瘤細胞免疫力,獲

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