異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)在腦膠質瘤中的表達及意義.pdf

1、目的:通過對WHOⅡ-Ⅲ級膠質瘤組織中異檸檬酸脫氫酶同工酶1(Isocitrate Dehydrogenase IDH1)的正常酶活性及酶蛋白含量的測定來探討膠質瘤中IDH1基因突變表達的作用機制。
　　方法:56例人腦膠質瘤組織標本取自于2012年7月至2013年12月河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院神經外科手術標本，病理診斷由醫(yī)院病理科按WHO腦腫瘤分類分級標準（2007年）進行，其中星形細胞瘤(Ⅱ級)10例，少突膠質細胞瘤(Ⅱ級)12例

2、，少突星形細胞瘤(Ⅱ級)5例，間變型星形膠質細胞瘤(Ⅲ級)15例，間變形少突膠質細胞瘤(Ⅲ級)14例。另外取腦外傷開顱術中正常腦組織（額葉及顳葉）5例作為對照。所有腫瘤標本及正常腦組織標本均快速入液氮中-80℃凍存。采用酶聯免疫吸附測定法(enzyme-linked immuno sorbent assay ELISA)方法中的雙抗體夾心法檢測所有標本組織IDH1正常酶活性。將以上標本為3組:正常腦組織組、Ⅱ級膠質瘤組和Ⅲ級膠質瘤組。采

3、用蛋白質印跡法(Western Blot)同時測定3組標本IDH1酶蛋白含量，得出相應標本代表蛋白含量的灰度值，采用SPSS13.0進行統(tǒng)計分析。
　　結果:
　　1酶活性
　　采用ELISA法對實驗標本進行酶活性值檢測。以正常腦組織組酶活性值范圍為標準，將所有腫瘤組織酶活性值分為低活性組和高活性組，數值以均數±標準差表示，結果顯示:正常腦組織組（n=5）為80.297±3.357;低活性組（n=35）為48.755±

4、6.837;高活性組（n=21）為132.246±14.887。將以上三組兩兩比較，均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。低活性組腫瘤例數為35，約占總腫瘤例數的62.5％。
　　2酶含量
　　采用Western Blot法對標本進行酶蛋白含量測定。數值以均數±標準差表示，正常腦組織組（n=5）:0.2609±0.0653，Ⅱ級膠質瘤（n=27）:0.4577±0.8321，Ⅲ級膠質瘤（n=29）:0.7110±0.0774。以

5、上三組兩兩比較，均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　3酶活性與酶蛋白含量相關性分析
　　采用Pearson計算相關分析，Ⅱ級膠質瘤相關系數0.009;Ⅲ級膠質瘤相關系數0.201;所有Ⅱ、Ⅲ級腫瘤相關系數0.071，酶活性大小與酶含量多少相關性不明顯。
　　結論:
　　1與正常對照組相比，腦膠質瘤組中IDH1正常酶活性存在明顯差異，活性低于正常的占62.5％，高于正常的占37.5％。結果與目前相關亞型膠質瘤研

6、究IDH1基因突變率相當，存在IDH1正常酶活性降低的膠質瘤中可認為含有IDH1基因突變。
　　2與正常對照組相比，膠質瘤組織中IDH1酶蛋白含量明顯增高，且所測膠質瘤中，Ⅱ級腫瘤IDH1酶蛋白含量較Ⅲ級腫瘤更高。酶蛋白表達與腫瘤級別相關，提示腫瘤的惡性水平在一定程度上影響著IDH1酶蛋白的含量。
　　3膠質瘤組織中，無論IDH1正常酶活性的高低與酶蛋白含量多少并無明顯相關聯系，提示雖然IDH1變異基因表達降低了IDH1正常