抑癌基因單核苷酸多態(tài)性與鼻咽癌遺傳易感性研究.pdf

1、背景與目的：
　　鼻咽癌是我國的高發(fā)腫瘤，也是我區(qū)高發(fā)腫瘤之一，其病因包括EB病毒的感染、化學致癌因素及遺傳易感因素等，然而在同一地區(qū)同樣的暴露條件下的不同人群并不都患腫瘤，其中必然存在個體差異，即遺傳易感性。單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide Polymorphisms，SNPs)是人類可遺傳的變異中最常見的一種，占所有已知多態(tài)性的90％以上，是近年來腫瘤研究熱點之一。本項目的主要目的是研究相關抑癌基因的單核苷酸

2、多態(tài)性與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展的關系，為鼻咽癌的診治提供相關理論基礎。選擇與鼻咽癌相關的多個抑癌基因，包括p53、p16及Rb基因，通過對鼻咽癌患者與正常對照人群相關抑癌基因重要的SNP位點進行對比研究，期望闡明遺傳易感性在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用，也可以應用于鼻咽癌高危人群的篩選，為鼻咽癌的早期干預提供理論基礎。
　　本研究計劃對鼻咽癌與正常對照人群p53、p16及Rb基因6個重要的SNP位點進行對比研究，期望闡明相關抑癌基因p53、p

3、16及Rb基因在廣西鼻咽癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其相互關系，為進一步開發(fā)基因芯片實現(xiàn)高通量檢測打下基礎，對鼻咽癌的診治提供新的思路，進一步降低鼻咽癌發(fā)生率和死亡率，以更好地為廣大患者服務。
　　材料與方法：
　　1.樣本與資料的收集
　　應用病例-對照研究的方法在廣西南寧人群中，收集了2010年6月到2011年4月臨床資料完整的在廣西醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院放療科住院患者的血液標本200例，男性100例，女性100例;正常

4、對照組200例:男性100例，女性100例。兩組人群血液標本都來源于廣西南寧，均為南寧本地居民。鼻咽癌組和對照人群組界定標準:鼻咽癌組:經(jīng)臨床和病理學均確診為癌，每位患者住院之前均未接受過化學治療、放射治療或生物治療等治療措施的干預。對照人群組:來源于同期身體健康的志愿獻血者。
　　2.實驗方法
　　用試劑盒法提取得到血液的DNA，經(jīng)過定量分析后置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｓ镁酆厦告準椒磻?限制性片段長度多態(tài)性方法(polym

5、erase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)及測序方法分析基因多態(tài)性及其基因突變分布頻率。
　　結(jié)果：
　　本實驗研究主要對常見的抑癌基因的多態(tài)性與鼻咽癌的遺傳易感性的關系進行的初步研究，所得的結(jié)果如下:
　　1.p53、p16及Rb基因多態(tài)性與鼻咽癌遺傳易感性的關聯(lián)分析
　　1.1 p53基因
　　1.1.1

6、在鼻咽癌組與對照人群組p53基因rs117562731位點攜帶變異等位基因的頻率分別為30.0％(60/200)和8.0％(16/200)。兩組之間基因型分布比較，差異有統(tǒng)計學意義（x2=31.449，P=0.000）。
　　1.1.2在鼻咽癌組與對照人群的p53基因rs114831472位點攜帶變異等位基因的頻率分別為12.5％(25/200)和7.5％(15/200)。兩組之間基因分布比較，差異無統(tǒng)計學意義(x2=2.778，

7、P=0.096)。
　　1.2 p16基因
　　1.2.1在鼻咽癌組與對照人群的p16基因rs80235406位點攜帶變異等位基因的頻率分別為26.5％(53/200)和9.0％(18/200)。兩組之間基因分布比較，差異有統(tǒng)計學意義（x2=20.977，P=0.000）。
　　1.2.2在鼻咽癌組與對照人群的p16基因rs121434309位點攜帶變異等位基因的頻率分別為22.5％(45/200)和8.5％(17/2

8、00)。兩組之間基因分布比較，差異有統(tǒng)計學意義（x2=14.965，P=0.000）。
　　1.3 Rb基因
　　1.3.1在鼻咽癌組與對照人群的Rb基因rs117538467位點攜帶變異等位基因的頻率分別為34.5％(69/200)和11.5％(23/200)。兩組之間基因分布比較，差異有統(tǒng)計學意義（x2=29.870，P=0.000）。
　　1.3.2在鼻咽癌組與對照人群的Rb基因rs117538467位點攜帶變異

9、等位基因的頻率分別為28.0％(56/200)和12.5％(25/200)。兩組之間基因分布比較，差異有統(tǒng)計學意義（x2=14.877，P=0.000）。
　　2.p53、p16及Rb基因多態(tài)性與鼻咽癌臨床表型的關聯(lián)研究
　　2.1與AA基因型比較，p53基因rs114831472位點的GG基因型的頻率在T1組中高于T2-4組(7.9％VS1.2％)，差異有顯著性，提示GG基因型與局部侵襲（T分期）有顯著性關聯(lián)(p=0.01

10、7)。
　　p53基因rs117562731 SNP位點CT基因型的頻率與CC基因型頻率比較，在M1組中高于M0組(44.4％ VS15.7％)，差異有顯著性，提示CT基因型與遠處轉(zhuǎn)移（M分期）有顯著性關聯(lián)(p=0.030)。
　　2.2 p16基因rs80235406 SNP位點TT基因型的頻率與CC基因型頻率比較，在N0-1組中明顯低于N2-N3組(1.6％VS9.4％)，差異有顯著性，說明TT基因型與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（N分期

11、）有顯著性關聯(lián)(p=0.011)。
　　p16基因rs80235406 SNP位點TT基因型的頻率與CC基因型頻率比較，在M0組中明顯低于M1組(3.1％ VS33.3％)，p16基因rs121434309 SNP位點GG基因型的頻率與AA基因型頻率比較，在M1組中高于M0組(22.2％ VS2.1％)，差異有顯著性，說明這兩個基因型與遠處轉(zhuǎn)移（M分期）均有顯著性關聯(lián)(p=0.000和p=0.001)。
　　2.3 Rb基因

12、rs117538467 SNP位點GG基因型的頻率與CC基因型頻率比較，在M0組中明顯低于M1組(4.2％ VS33.3％)，Rb基因rs117209587 SNP位點GG基因型的頻率與AA基因型頻率比較，在M1組中高于M0組(22.2％ VS3.1％)，差異有顯著性，說明這兩個基因型與遠處轉(zhuǎn)移（M分期）均有顯著性關聯(lián)(p=0.023和p=0.002)。
　　結(jié)論：
　　1.鼻咽癌組與正常對照人群的p53基因rs114831

13、472位點基因突變與分布無明顯差異，說明p53基因rs114831472位點基因突變與鼻咽癌的發(fā)生無顯著相關性。
　　2.鼻咽癌組與正常對照人群的p53基因rs117562731位點基因突變與分布有明顯差異，說明p53基因rs117562731位點基因突變與鼻咽癌的發(fā)生有顯著相關性。
　　3.鼻咽癌組與正常對照人群的p16基因rs80235406位點和rs121434309位點基因突變與分布有明顯差異，說明p16基因的兩個位