酵母雙雜交法對STK11羥基端互作蛋白的篩選.pdf

1、PJ綜合征(Peutz-Jeghers syndrome，PJS)是一種常染色體顯性遺傳疾病(OMIM，175200)，發(fā)病率約為1/8300—280000。其主要的臨床表現為胃腸道錯構瘤樣息肉、皮膚粘膜色素斑，故又稱之為黑斑息肉綜合征。本病患者的多種腫瘤易感性為其另一備受關注的主要原因。目前，PJS唯一被確認的致病基因是STK11基因（又名LKB1基因），STK11/LKB1基因位于19p13.3，整個基因跨度23kb，cDNA全長2

2、158bp，編碼區(qū)1302bp，有10個外顯子和11個內含子。STKll/LKB1是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，參與了個體胚胎發(fā)育及細胞極化等重要生命活動的調控，在抑制腫瘤細胞增殖、調節(jié)細胞能量代謝等方面亦發(fā)揮了重要作用，并與P53、Wnt及AMPK等多種信號系統(tǒng)相關。其表達豐度在個體發(fā)育的不同階段存在組織與時相差異性。
　　 STK11/LKB1基因大部分的致病性突變與其催化活性域的突變致使的STKII/LKBI激酶功能喪失相

3、關，但是許多報道證實在部分PJS病人和散發(fā)腫瘤患者中，也存在STK11/LKB1羧基端的突變。STK11/LKB1羧基端非催化區(qū)是由8、9號外顯子編碼的，包括了309-433氨基酸，由124個殘基組成的。羧基端非催化調節(jié)區(qū)域包含了異戊烯化基序。目前己驗證STK11/LKBI羧基端有五個磷酸化位點：兩個殘基是自磷酸化位點(Thr336和Thr402)，其他三個是被上游激酶磷酸化的位點(Ser325，Thr363，Ser428)。有研究發(fā)現

4、：過表達STK11/LKBi羧基斌可以干擾STKll/LKBI的功能，表跟STK11/LKBl羧基端具有重要的調節(jié)作用，可能通過與下游的蛋白質相互作用來實現其調節(jié)功能，其羧基端突變可能影響了這種結合能力。
　　 本研究利用Clontech公司的第四代酵母雙雜交系統(tǒng)MatchmakerTM Gold Yeast Two-Hybrid System初步篩查出STK11/LKB1羧基端的互作蛋白PGM1（葡萄糖磷酸變位酶1），為后續(xù)的