幾種化合物對(duì)THP-1細(xì)胞TLR-4信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)因子的影響.pdf

1、銀屑病等炎癥性皮膚病是一組與免疫紊亂密切相關(guān)的疾病，多種免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子共同參與了炎癥性皮膚病的發(fā)病過(guò)程。細(xì)胞因子復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)以及相互調(diào)控機(jī)制均提示單一治療靶點(diǎn)的藥物已不適合此類(lèi)疾病的治療，目前多靶點(diǎn)藥物在炎癥性皮膚病治療方面的研究日益成為重點(diǎn)。
　　 TLR-4是Toll樣受體家族的重要成員，近來(lái)研究證實(shí)TLR-4與銀屑病中天然免疫紊亂的現(xiàn)象相關(guān)聯(lián)，樹(shù)突狀細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞在銀屑病炎癥反應(yīng)過(guò)程中起到重要的調(diào)節(jié)作用。以樹(shù)突狀細(xì)

2、胞及巨噬細(xì)胞作為銀屑病治療靶點(diǎn)的前景也越來(lái)越明朗。
　　 THP-1細(xì)胞是利用白血病患者血液中的單核細(xì)胞建立的細(xì)胞株，能夠分泌炎性細(xì)胞因子，并且經(jīng)誘導(dǎo)后可轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞。THP-1細(xì)胞是體外研究人單核-巨噬細(xì)胞功能的良好替代細(xì)胞，已在相關(guān)研究中廣泛使用。研究相關(guān)化合物對(duì)單核細(xì)胞TLR-4信號(hào)傳導(dǎo)通路的干預(yù)作用，對(duì)銀屑病等炎癥性皮膚病的治療及探究其抗炎-免疫機(jī)理具有一定意義。
　　 姜黃素是姜黃的主要活性成分，其藥理作用廣

3、、毒性低具有廣闊的藥用前景。姜黃素的多種藥理活性提示其具有作為治療銀屑病等炎癥性皮膚病藥物的潛力；鹽酸13-已基小檗堿（HB-13）和鹽酸13-已基巴馬?。℉P-13）是具有顯著抗炎作用的化合物，先前實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)：HB-13和HP-13對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞中INF-γ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的多個(gè)環(huán)節(jié)有明顯抑制作用。本研究以人單核細(xì)胞株THP-1細(xì)胞為靶細(xì)胞，探究姜黃素、HB-13和HP-13三個(gè)化合物對(duì)人單核.巨噬細(xì)胞TLR-4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)信號(hào)分

4、子及其下游因子表達(dá)的干預(yù)作用。
　　 第一章化合物對(duì)小鼠非特異性炎癥反應(yīng)的影響
　　 采用佛波酯（TPA）致小鼠鼠耳腫脹非特異急性炎癥模型，檢測(cè)姜黃素、HB-13、HP-13局部外用給藥和系統(tǒng)給藥的體內(nèi)抗炎活性。結(jié)果顯示：小鼠腹腔注射姜黃素（100mg/kg），HB-13（10mg/kg），HP-13（20mg/kg）對(duì)小鼠未產(chǎn)生無(wú)明顯毒性反應(yīng)。局部外用姜黃素（0.30 mg）、HB-13（0.38 mg）、HP-13（

5、0.36 mg），以及腹腔注射姜黃素（50、100mg/kg）、HB-13（5、10mg/kg）、HP-13（10、20mg/kg）對(duì)TPA誘導(dǎo)的小鼠鼠耳腫脹急性炎癥反應(yīng)有明顯的抑制作用，抑制率均達(dá)到50％以上。本章結(jié)果表明：無(wú)論局部外用或系統(tǒng)給予一定劑量的姜黃素、HB-13和HP-13均能產(chǎn)生明顯的抗炎作用。
　　 第二章化合物對(duì)THP-1細(xì)胞TLR-4信號(hào)傳導(dǎo)通路中信號(hào)分子表達(dá)的影響
　　 通過(guò)體外培養(yǎng)的THP-1細(xì)

6、胞，用外源性L(fǎng)PS作為刺激劑，用RT-PCR法檢測(cè)LPS刺激THP-1細(xì)胞后TLR-4信號(hào)傳導(dǎo)通路中IRAK1、TRAF6、NF-кB、TNF-α、IL-1β等信號(hào)分子mRNA表達(dá)情況，同時(shí)研究化合物對(duì)LPS刺激THP-1細(xì)胞后上述目的基因mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：1μg/mL LPS處理THP-1細(xì)胞4小時(shí)后，可明顯上調(diào)TRAF6、IRAK1、NF-кB、TNF-αIL-1βmRNA的表達(dá)。藥物影響試驗(yàn)結(jié)果表明，姜黃素（25、50

7、μg/ml）、HB-13（0.39、0.78μg/ml）和HP-13（1.56、3.121μg/ml）可以明顯抑制LPS誘導(dǎo)的上述目的基因mRNA的高表達(dá)，抑制率可達(dá)到90％以上。本章結(jié)果表明：11μg/ml LPS處理THP-1細(xì)胞4小時(shí)可形成TLR-4信號(hào)通路相關(guān)信號(hào)蛋白的體外誘導(dǎo)高表達(dá)模式，姜黃素、HB-13、HP-13均可干預(yù)THP-1細(xì)胞TLR-4通路中IRAK1和TRAF6基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而下調(diào)下游NF-κB mRNA的表達(dá)，

8、最終影響下游細(xì)胞因子TNF-α和IL-1βmRNA的表達(dá)。
　　 第三章化合物對(duì)THP-1細(xì)胞TLR-4信號(hào)傳導(dǎo)通路下游分子表達(dá)的影響
　　 ELISA法測(cè)定化合物對(duì)LPS刺激THP-1細(xì)胞后TNF-α、IL-8、IL-1β分泌的影響。結(jié)果顯示：未經(jīng)刺激的THP-1細(xì)胞低水平表達(dá)TNF-α、IL-8、IL-1β，1μg/mL LPS刺激24h后，TNF-α、IL-8、IL-1β的表達(dá)顯著上升。姜黃素、HB-13和HP-1

9、3均能明顯抑制LPS刺激引起的TNF-α、IL-8和IL-1β的表達(dá)（P<0.05，P<0.01），IC50值約為：TNF-α：姜黃素：30.4671μg/mL，HB-13:0.2924μg/mL，HP-13:2.0182μg/mL；IL-8：姜黃素：19.0561μg/mL，HB-13:0.5132μg/mL，HP-13:1.7766μg/mL；IL-1β：姜黃素：32.9003μg/mL，HB-13:0.4547μg/mL，HP-1