IP3介導的鈣信號在fractalkine誘導小鼠痛覺過敏中的機制探討.pdf

1、第一部分 fractalkine 對BV-2 小膠質細胞胞內鈣離子濃度及其胞內效應的影響
　　 目的:探討fractalkine誘導BV-2小膠質細胞胞內鈣離子濃度變化的機制及其產生的胞內效應。
　　 方法:不同濃度fractalkine刺激BV-2小膠質細胞，激光共聚焦顯微鏡測定[Ca2+]I的變化；10nM fractalkine孵育BV-2小膠質細胞0、30、60、120、240min，westernblot測定P

2、38mapk、p-P38mapk的表達；10nM fractalkine孵育BV-2小膠質細胞0、6、12、24h，RT-PCR及Elisa檢測白介素1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）基因水平及蛋白水平的表達。預先60s給予fractalkine的受體的拮抗劑anti-CX3CR1和IP3R的拮抗劑2-APB再給予fractalkine，激光共聚焦顯微鏡測定[Ca2+]I的變化；Westernblot測定P38mapk、p

3、-P38mapk的表達；預先60s給予fractalkine的受體的拮抗劑anti-CX3CR1、IP3R的拮抗劑2-APB和P38mapk的抑制劑再給予fractalkine，Elisa檢測白介素1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的表達。
　　 結果：fractalkine引起B(yǎng)V-2細胞[Ca2+]I增加，p-P38mapk及其IL-1β、TNF-α表達增加；給與fractalkine 受體的拮抗劑anti-C

4、X3CR1、IP3R的拮抗劑2-APB可以抑制fractalkine引起的胞內鈣離子濃度的增加，降低p-P38mapk及其IL-1β、TNF-α表達；給予P38mapk的抑制劑SB203580降低IL-1β、TNF-α表達。
　　 結論：fractalkine通過與小膠質細胞上的CX3CR1 受體結合，促發(fā)小膠質細胞內的IP3 鈣信號，激活P38mapk，引起IL-1β和TNF-α表達。
　　 第二部分趨化因子fract

5、alkine在熱痛敏中作用的實驗研究
　　 目的:探討趨化因子fractalkine在熱痛敏中的作用。
　　 方法:清潔級成年雄性昆明小鼠分成五組，側腦室注射生理鹽水組、fractalkine組、anti-CX3CR1+fractalkine組、2-APB+fractalkine組和SB203580+fractalkine組。側腦室注射0、30、60、120、240min，測量昆明小鼠足底的熱痛閾；各組在上述時間點處死小

6、鼠并取腦組織，western blot 測定p-P38mapk 及P38mapk的表達；各組在側腦室注射0、6、12、24h 時處死小鼠并取腦組織，Elisa 檢測IL-1β和TNF-α的表達；fractalkine組在側腦室注射0、6、12、24h 時處死小鼠并取腦組織，熒光定量RT-PCR檢測IL-1β和TNF-α基因表達；側腦室注射fractalkine 4h 時處死小鼠，免疫熒光檢測fractalkine作用的靶細胞。
　

7、　 結果:1.Fractalkine組注射60、120、240min，昆明小鼠的熱痛閾較其它四組顯著性降低。2.免疫熒光顯示外源性的fractalkine 通過與小膠質細胞的受體結合與小膠質細胞特異性標記物Iba-1 共染色。3.Fractalkine組IL-1β、TNF-α蛋白表達較其他四組顯著性增加；fractalkine組側腦室注射6、12、24h，IL-1β、TNF-α的基因表達增強。4.注射30、60、120min，frac