冬凌草甲素對人結腸癌HCT-8細胞株的抑制生長及誘導凋亡的作用.pdf

1、背景與目的:大腸癌是常見的惡性腫瘤之一,近年來發(fā)病率迅速增長.中國大腸癌的發(fā)病率已從30年前的10/10萬上升到現在的30/10萬,在惡性腫瘤的排名中,從第6位上升到第3位.大量的研究資料表明冬凌草甲素對多種腫瘤具有生長抑制作用,但冬凌草甲素對結腸癌的作用國內外尚未見有報道.該課題擬通過體外實驗探討冬凌草甲素誘導人結腸癌細胞株HCT-8凋亡作用的機理.技術路線為:用MTT法測定不同濃度冬凌草甲素對細胞的生長抑制作用,采用HE染色法觀察冬

2、凌草甲素誘導人結腸癌細胞株HCT-8凋亡的形態(tài)學變化;以免疫組化技術檢測凋亡相關蛋白caspase3和survivin的表達情況,利用流式細胞儀測定不同濃度的冬凌草甲素作用不同時間誘導細胞凋亡的凋亡率及細胞周期的變化,以期探討冬凌草甲素誘導細胞凋亡的作用機理,從而為冬凌草甲素作為抗腫瘤藥物應用于臨床提供理論依據.方法:1.細胞株選用人結腸癌細胞株HCT-8為材料;2.MTT比色法測定不同濃度冬凌革甲素對結腸癌細胞的生長抑制率;3.HE染

3、色法觀察5μg/ml冬凌草甲素作用48小時后的細胞形態(tài)學變化;.4.免疫組化SP法檢測5μg/ml冬凌草甲素作用48小時后實驗組與對照組細胞凋亡相關基因Caspase3、Survivin的蛋白表達變化;5.流式細胞儀檢測不同處理組的周期時相變化及凋亡情況;6.實驗數據經SPSS10.0統(tǒng)計軟件處理,采用正態(tài)性檢驗,單因素方差分析,獨立樣本t檢驗,χ<'2>檢驗,以α=0.05為檢驗水準.結論:1 冬凌草甲素對人結腸癌細胞株HCT-8的生