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文檔簡介
1、鉛是一種對人體多個系統(tǒng)和器官具有毒性的重金屬元素,在體內無任何生理功能,理想血液鉛的濃度為0。由于鉛在環(huán)境中可長期蓄積,不能降解,可以通過呼吸系統(tǒng)和消化器官進入人體,99%從腎臟代謝,腎臟是鉛中毒的主要受損器官。
研究目的:本試驗通過研究醋酸鉛導致大鼠腎小管上皮細胞(NRK)的氧化損傷程度、細胞凋亡情況以及死亡受體通路在醋酸鉛致NRK細胞凋亡過程中的作用,旨在探討鉛對動物腎臟毒性的作用機制,為防治鉛中毒提供理論依據。
2、 研究方法:體外培養(yǎng)NRK細胞,于細胞對數生長期加入0,2,10和50μM的醋酸鉛作用24 h后,采用MTT法檢測細胞增殖率,黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法測定細胞中丙二醛(MDA)含量,比色法檢測細胞中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性,ABTS快速法測定細胞中的總抗氧化能力(T-Aoc)。用Hoechst33258和AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡,Western bl
3、ot檢測FAS、FASL及Caspase-8的蛋白表達量,流式細胞儀檢測Z-IETD-FMK對細胞凋亡的抑制作用。
結果:NRK細胞在37℃、5% CO2環(huán)境下生長良好,24~72 h為細胞對數生長期。試驗所選醋酸鉛濃度2、10、50μM均可通過降低SOD、 GSH-Px活性及細胞的總抗氧化能力,升高MDA的含量而引起細胞的氧化損傷,并呈劑量-效應相關性;可呈劑量依賴性誘導細胞凋亡。凋亡結果顯示醋酸鉛可通過死亡受體途徑誘導NR
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