大鼠腦缺血再灌注后CathepsinB介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與P38MAPK信號(hào)通路的關(guān)系.pdf

1、背景與目的：
　　腦缺血再灌注后缺血半暗帶區(qū)會(huì)發(fā)生細(xì)胞凋亡。P38MAPK、Cathepsin B參與了凋亡的過(guò)程。本研究通過(guò)Cathepsin B特異性抑制劑CA-074對(duì)大鼠腦缺血再灌注模型的干預(yù)來(lái)檢測(cè)P-P38與Cathepsin B蛋白的表達(dá)，從而研究?jī)烧咧g的關(guān)系。
　　方法：
　　體重為280±20g，10-12周齡清潔級(jí)健康雄性大鼠56只，分為假手術(shù)組（n=6）、腦缺血再灌注模型組（n=25）和 CA-0

2、74干預(yù)組（n=25）。腦缺血再灌注模型組和CA-074干預(yù)組根據(jù)再灌注時(shí)間又分為再灌注2h、6h、12h、24h四個(gè)亞組，再灌注2h、6h、12h各5只，再灌注24h10只。干預(yù)組的制備，先采用側(cè)腦室注射方法給予20ugCA-074/1ulDMSO，半小時(shí)后線(xiàn)栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞（MACO）模型；模型組與假手術(shù)組的制備，先采用側(cè)腦室注射方法給予1ulDMSO，半小時(shí)后線(xiàn)栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞（MACO）模型。利用神經(jīng)功能評(píng)分

3、標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估神經(jīng)功能缺失變化；利用TTC染色、免疫組化、TUNEL法分別檢測(cè)腦梗死體積變化、腦皮質(zhì)區(qū)P-P38與Cathepsin B蛋白的表達(dá)和腦皮質(zhì)區(qū)細(xì)胞凋亡變化。
　　結(jié)果：
　　1.TTC結(jié)果：模型組24h相對(duì)梗死體積為24.73±0.97％，干預(yù)組24h相對(duì)梗死體積為13.46±0.64％，差異有顯著性(P<0.05)。
　　2.缺血再灌注腦組織中P38MAPK水平的表達(dá)。假手術(shù)組：未見(jiàn)明顯的P-P38免疫活性表

4、達(dá)；模型組：2h時(shí)就可看到少量的P-P38，6h達(dá)到高峰，12h與24h下降；干預(yù)組：各個(gè)時(shí)間點(diǎn)P-P38免疫活性表達(dá)與同期的模型組相比減少，差異有顯著性(P<0.05)。
　　3.缺血再灌注腦組織中Cathepsin B水平的表達(dá)。假手術(shù)組：未見(jiàn)明顯的Cathepsin B免疫活性表達(dá)；模型組：2h時(shí)就可看到少量的Cathepsin B，6h達(dá)到最高峰，12h與24h下降；干預(yù)組：各個(gè)時(shí)間點(diǎn)Cathepsin B免疫活性表達(dá)與同

5、期的模型組相比減少，差異有顯著性(P<0.05)。
　　4.TUNEL法結(jié)果。假手術(shù)組：可見(jiàn)少量凋亡細(xì)胞；模型組：呈時(shí)間依賴(lài)性，于再灌注后2h缺血側(cè)缺血半暗帶可以觀察到凋亡細(xì)胞明顯增多，至24h達(dá)高峰，各時(shí)間點(diǎn)的差異均有顯著性（P<0.05）；干預(yù)組：干預(yù)后可以顯著減少大鼠腦缺血再灌注損傷后凋亡細(xì)胞數(shù)量，與模型組相比，干預(yù)組除了再灌注后2h外其它時(shí)間點(diǎn)凋亡細(xì)胞數(shù)均明顯減少（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　大鼠腦缺血再