表皮生長(zhǎng)因子受體活化與胰腺癌細(xì)胞解離關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名： 奎魚 日期： 三! ! !

2、：苧：蘭羅中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國(guó)醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容( 保密內(nèi)容除外) ，以采用影印、縮印或

3、其他手段保存論文。名名期簽簽 者師 作教 文導(dǎo)論指日·中文論著摘要·表皮生長(zhǎng)因子受體的活化與胰腺癌細(xì)胞解離之間的關(guān)系目的本研究通過分析胰腺癌細(xì)胞系中表皮生長(zhǎng)因子受體( E G F R ) 、磷酸化E G F R( p ．E G F R ) 和其下游激酶M E K l ／2 、E R K l ／2 的表達(dá)，進(jìn)一步闡述胰腺癌細(xì)胞解離的分子機(jī)制。方法本研究采用2 種倉(cāng)鼠胰腺癌細(xì)胞系——高侵襲潛能的P C ．1 ．0 和低侵

4、襲潛能的P C 一1 細(xì)胞；也采用2 種人胰腺癌細(xì)胞系——高侵襲潛能的A s P C ．1 和低侵襲潛能的C a p a n ．2 細(xì)胞。上述細(xì)胞系均以R P M I ．1 6 4 0 培養(yǎng)液( G i b c o ．B R L ，G r a n d I s l a n d ，N Y ) 培養(yǎng)，并加1 0 ％胎牛血清( B i o s e r u m ，V i c t o r i a ，A u s t r a l i a ) 、1 0

5、0 U ／m L 青霉素G 和1 0 0P g ／m L 鏈霉素，于3 7 ℃含5 ％C 0 2 的孵箱內(nèi)培養(yǎng)。本研究采用兔多克隆抗體作用于人E G F R ，p - M E K l ／2 ，p - E R K l ／2 的氨基酸序列( S a n t a C r u zB i o t e c h n o l o g y ，S a n t aC r u z ，C A ) 、以及山羊多克隆抗體作用于人p - E G F R 的氨基酸序列(

6、 S a n t aC r u zB i o t e c h n o l o g y ，S a n t a C r u z ，C A ) ，也利用異硫氰酸熒光素( f l u o r e s c e i n i s o t h i o c y a n a t e ，F(xiàn) I T C ) 和若丹明標(biāo)記的熒光第二抗體( S a n t aC r u zB i o t e c h n o l o g y ) 。將上述4 種細(xì)胞系種植在室玻片上，

7、并培養(yǎng)3 6 h 。為了評(píng)價(jià)這些胰腺癌細(xì)胞中E G F R 、p - E G F R 、p - M E K l ／2 和p - E R K l ／2 表達(dá)的變化，加入P C ．1 ．0細(xì)胞的培養(yǎng)液( 含解離因子D F ，D F ．C M ) 和A G l 4 7 8 - 特異性E G F R 抑制劑( C a l b i o c h e m ，D a r m s t a d t ，G e r m a n y ) 。在活化實(shí)驗(yàn)中，將P C

8、 ．1 和C a p a n - 2 細(xì)胞加入到含有4 0 ％D F —C M 的培養(yǎng)液中培養(yǎng)3 6h 。抑制實(shí)驗(yàn)中，在P C ．1 ．0 和A s P C ．1細(xì)胞培養(yǎng)液中加入1 0p MA G l 4 7 8 。另外，P C ．1 和C a p a n ．2 細(xì)胞經(jīng)D F —C M 培養(yǎng)3 6h 后再繼續(xù)用1 0 l a M A G l 4 7 8 培養(yǎng)3 6 h 。培養(yǎng)后，在室溫下以O(shè) ．5 ％多聚甲醛固定1 0 m i n ，再