低強度超聲聯(lián)合神經干細胞移植對大鼠脊髓損傷功能恢復的影響.pdf

1、第一部分 新生大鼠神經干細胞的分離、培養(yǎng) 目的:神經干細胞(neural stem cells，NSCs)是近年來神經科學領域的研究熱點。NSCs是具有自我更新能力和多向分化潛能的細胞，可分化為神經系統(tǒng)的神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞，在胚胎及成年哺乳類動物中廣泛存在。NSCs的分離培養(yǎng)是其基礎和應用研究的前提，本部分目的在于獲得新生大鼠NSCs，為深入研究其增殖分化及在SCI中的應用奠定基礎。 方法:從新生2

2、4h內大鼠端腦及中腦部位分離NSCs，采用體外無血清懸浮培養(yǎng)，以獲得能在體外長期生存的NSCs；通過免疫細胞化學檢測NSCs標記物nestin表達及分化為神經元和膠質細胞的能力。 結果:獲得的NSCs能在體外長期生存，具有很強的增殖能力、自我更新能力，表達nestin，具有多向分化能力，能分化為神經元和膠質細胞。 結論;成功地從新生大鼠端腦和中腦中分離得到了能在體外長期培養(yǎng)的NSCs，培養(yǎng)的NSCs表達nestin，有自

3、我更新、多向分化的特點，通過培養(yǎng)細胞大量擴增。 第二部分 低強度超聲聯(lián)合神經干細胞移植對大鼠脊髓損傷功能恢復的實驗 目的:脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)的修復一直以來是神經科學研究領域的一大難題，由于脊髓組織自身的修復能力極其有限，激活的內源性神經干細胞再生不足以修復損傷的脊髓組織，因此，利用外源性細胞移植來替代丟失的神經細胞修復受損的脊髓、重建神經通路一直以來是人們研究的熱點。神經干細

4、胞因其來源于神經組織、具有自我更新能力、具有分化為神經元和神經膠質細胞的潛能、能遷移到達損傷或疾病部位等特點，成為脊髓損傷細胞替代療法的理想移植材料。近年來，隨著對低強度超聲生物學效應的研究發(fā)現(xiàn)，低強度超聲具有促進細胞生長、幫助實驗性周圍神經損傷的一定作用。本實驗旨在觀察源于中腦端腦的神經干細胞移植聯(lián)合應用超聲對脊髓損傷功能恢復的作用。 方法: 40只成年SD大鼠隨機分為正常A組對照組、B組損傷組(SCI組)、C組單純移植NSC

5、s組(NSCs)和D組NSCs移植聯(lián)合應用超聲組(NSCs+LIU)，每組10只。除A組外，其余3組制作T8平面脊髓全橫斷模型，將含有NSCs懸液的明膠海綿植入C組和D組橫斷損傷脊髓處，B組在損傷處移植含細胞培養(yǎng)液的明膠海綿，D組同時應用超聲治療。2月后，實驗各組采用BBB評分、皮層體感誘發(fā)電位(CSEP)、電鏡和免疫組織化學觀察大鼠運動傳導功能恢復的作用。 結果:對照組BBB評分21分。術后2月BBB評分，B組(2.5±1.0

6、5)分，C組(5.0±0.89)分，D組(6.8±0.75)分。C、D組評分明顯高于B組，以D組最高(P＜0.05)。但未達到正常。脊髓損傷后，B、C、D組的CSEP波消失，術后2個月C組D組的波形有所恢復，但潛伏期延長，波幅幅度降低，而B組波形仍完全消失。電鏡顯示，C組、D組損傷區(qū)見再生髓鞘、軸突及神經元。而B組仍見明顯的髓鞘細胞變性及瘢痕組織。免疫組織化學顯示D組移植的NSCs分化為神經元數(shù)量較多，分化為膠質細胞的數(shù)量較少，且形成的