先天性白內障致病基因篩查及CRYAB基因突變誘導HLE細胞凋亡研究.pdf

1、先天性白內障是指多數(shù)在出生前后已存在、少數(shù)在出生后逐漸形成晶狀體代謝紊亂或透明度下降的一類白內障。我國先天性白內障的發(fā)病率約為5‰，是兒童致盲的主要原因之一。從優(yōu)生優(yōu)育角度考慮，防治先天性白內障刻不容緩。
　　遺傳因素是先天性白內障形成的重要原因，遺傳方式以常染色體顯性遺傳(autosomal dominant inheritance，AD)最為常見，還包括常染色體隱性遺傳(autosomal recessive inherita

2、nce，AR)和X-染色體連鎖遺傳(X-linked inheritance，XL)。已發(fā)現(xiàn)的致病基因包括:晶狀體蛋白基因、膜蛋白基因、細胞骨架蛋白基因、轉錄調節(jié)因子基因、鐵蛋白輕鏈基因等。尋找先天性白內障的致病候選基因及突變，明確基因型與表型之間的關系，為先天性白內障的基因診斷、遺傳咨詢和產前診斷提供依據。
　　本研究主要包括3部分:第1部分利用PCR擴增和DNA測序技術對3個常染色體顯性先天性白內障家系和1個常染色體隱性先天性

3、白內障家系進行候選基因的篩查。結果四個家系分別發(fā)現(xiàn)5、6、7、9個SNP;另外還發(fā)現(xiàn)CA-010家系先證者CRYGB基因非編碼區(qū)g.8545 T缺失;CA-016家系先證者CRYBB3基因發(fā)現(xiàn)c.337 C＞G，導致第113位組氨酸突變?yōu)樘於彼?H113D)。因家系中其余所有人均攜帶此突變，推測H113D并非該家系致病基因突變。由于4個家系均尚未明確致病基因，有待進一步研究。
　　第2部分是首先構建野生型和P20R突變型CRYA

4、B基因真核表達載體，體外轉染人晶狀體上皮細胞(HLE)，流式細胞術與TUNEL法檢測細胞凋亡率，從抗凋亡角度探討晶狀體蛋白CRYAB基因突變(P20R)對其功能的影響。結果顯示野生型αB-晶狀體蛋白與突變型αB-晶狀體蛋白(P20R)在HLE細胞中均大量表達。野生型αB-晶狀體蛋白可顯著抑制H2O2誘導的細胞凋亡，而P20R突變型αB-晶狀體蛋白抗凋亡能力明顯下降，二者在抗凋亡方面具有顯著差異(P＜0.01)。
　　第3部分初步探