Cathepsin L在冠心病側枝循環(huán)建立中作用的機制探討.pdf

1、第一部分CathepsinL與冠心病側枝循環(huán)的臨床研究
　　目的：觀察冠心病病人中，側枝循環(huán)的建立與CathepsinL及其相關蛋白的關聯(lián)性。
　　方法：臨床診斷冠心病的病人，在行冠脈造影時留取動脈血，用ELISA檢測血清中CathepsinL，CystatinC，endostatin，PLGF等的水平，同時分析冠脈造影圖像，按照Rentrop評分將不同側枝循環(huán)患者進行分組，分析CathepsinL相關因子與側枝循環(huán)的相關性

2、，采用spss統(tǒng)計軟件分析結果。
　　結果：1.側枝循環(huán)豐富的冠心病患者其血漿中的CathepsinL，PLGF水平均較高，這兩個因子與側枝循環(huán)獨立相關。2.糖尿病組中，側枝豐富組含有較高濃度的CathepsinL，而非糖尿病組，側枝豐富組含有較高PLGF，這也許是因為糖尿病病人內環(huán)境中炎癥反應的增加，從而導致CathepsinL表達量的增加。3.無論起病方式如何，側枝豐富組比側枝不良組均含有較高濃度的CathepsinL和PLG

3、F。提示，CathepsinL/PLGF與側枝循環(huán)的關系可能不受局部動脈病變影響。4.ROC曲線分析，CathepsinL水平>22.43nM的“截值”能發(fā)現(xiàn)更多的豐富側枝(敏感性，42.6％：特異性，79.3％)。
　　結論：CathepsinL與側枝循環(huán)的聯(lián)系揭示了CathepsinL的促血管新生作用。
　　第二部分CathepsinL對HUVEC生物學特性的影響
　　目的：觀察Cathepsin對內皮細胞生物學特

4、性的影響。
　　方法：常規(guī)培養(yǎng)液中加入小劑量的天然CathepsinL蛋白(10nM)，大劑量的天然CathepsinL蛋白(30nM)以及CathepsinL特異性抑制劑Z-FF-FMK(10uM)，培養(yǎng)HUVEC24h后，使用CCK-8試劑盒檢測細胞增殖率，流式細胞儀檢測細胞凋亡率，涂有膠原的Transwell小室檢測細胞遷移/侵潤能力。
　　結果：1.小劑量外源性CathepsinL具有抑制細胞增殖的作用，而大劑量外源

5、性CathepsinL蛋白能夠促進細胞增殖。抑制細胞內源性CathepsinL后，細胞增殖率有所增加。而無論是細胞增殖增加還是受抑制，統(tǒng)計結果都沒有達到顯著性意義。這就提示，CathepsinL對細胞增殖的作用不明顯。2.外源性CathepsinL蛋白具有促進細胞凋亡的作用，且隨著CathepsinL蛋白濃度的增加，細胞早期凋亡率成劑量依賴性增加，而抑制細胞內源性CathepsinL蛋白的表達，則使細胞早期凋亡水平明顯降低了近一半(早期

6、凋亡率：3.37％，vs對照組早期凋亡率6.078％，P<0.05)，這就進一步提示了CathepsinL對細胞凋亡的促進作用。3.外源性CathepsinL蛋白具有明顯的促細胞遷移/侵潤的作用，而特異性的抑制了細胞內CathepsinL蛋白的表達后，則抑制了細胞的遷移/侵潤。
　　結論：CathepsinL可能通過促進內皮細胞遷移/侵潤來促血管新生，同時，CathepsinL還具有明顯的促細胞凋亡的作用。
　　第三部分Ca

7、thepsinL在高糖/高軟脂酸刺激下對HUVEC血管新生功能的調控
　　目的：觀察高糖/高軟脂酸刺激下CathepsinL對HUVEC細胞增殖，凋亡及遷移的影響，同時觀察高糖/高軟脂酸對HUVEC的CathepsinL蛋白表達和活性的影響。
　　方法：分別用不同濃度的葡萄糖/軟脂酸培養(yǎng)HUVEC，培養(yǎng)液中加入小劑量的天然CathepsinL蛋白(10nM)，大劑量的天然CathepsinL蛋白(30HM)以及Catheps

8、inL特異性抑制劑Z-FF-FMK(10uM)。培養(yǎng)HUVEC24h后，采用CCK-8試劑盒檢測細胞增殖率，流式細胞儀檢測細胞凋亡，涂有膠原的Transwell小室檢測細胞遷移。同時，采用Realtime-PCR檢測細胞CathepsinL的mRNA表達，采用Western-blot檢測CathepsinL的蛋白表達，采用熒光酶底物法檢測細胞CathepsinL的活性。
　　結果：1.高糖/高軟脂酸高能夠抑制內皮細胞增殖，促進凋亡

9、，抑制細胞遷移/侵潤。2.大劑量的外源性CathepsinL蛋白能夠明顯促進細胞遷移/侵潤，而特異性的抑制細胞內CathepsinL后，細胞遷移/侵潤明顯減少。3.大劑量的Cathepsin對細胞凋亡具有促進作用，而特異性的抑制細胞內CathepsinL后細胞凋亡減少。4.高糖/高軟脂酸能夠降低CathepsinL的活性，而不改變CathepsinL的基因和蛋白表達，提示高糖/高軟脂酸可能通過翻譯后修飾環(huán)節(jié)來影響CathepsinL的。