miRNA19a在肝癌中調控靶基因TNF的研究.pdf

1、目的:microRNAs是新發(fā)現的一種非編碼小分子單鏈RNA家族，在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，它通過與靶基因的信使RNA（mRNA）的3'-UTR的互補堿基配對結合，形成沉默復合體(RISC)，進而降解mRNA或使其翻譯受阻。miRNA17-92基因簇是一個高度保守的基因簇，編碼miRNA17、miRNA18、miRNA19a、miRNA20、miRNA19b和miRNA92六個基因簇。目前研究證實miRNA17-92在惡性腫瘤

2、的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用，如B細胞淋巴瘤，肺癌，惡性黑色素瘤。研究還發(fā)現miRNA19可能是miRNA17-92中的關鍵致癌因子。但是關于miRNA17-92基因簇參與調控肝癌的細胞生物學特性的具體作用和機制目前還不清楚。肝細胞刺激因子HPPCn(HepatopoietinCn)是我們實驗室在肝臟中發(fā)現的一種新的特異的肝細胞生長因子。已經有研究證實，肝癌標本中HPPCn相對于癌旁組織存在高表達，同時還發(fā)現肝細胞的癌變與HPPCn的高

3、表達有關，患者的存活率與HPPCn的高表達亦成負相關。有實驗證實HPPCn對肝臟星型細胞的激活作用可以通過調節(jié)腫瘤壞死因子TNF而被抑制。這提示HPPCn可能與miRNA17-92的表達存在一定的相關性。我們通過targetscan網站發(fā)現PTEN，TNF是miRNA19a的預測靶基因。本實驗中主要研究在肝癌發(fā)生發(fā)展中miRNA17-92的各基因簇與肝細胞生長因子HPPCn的關系及miRNA19a對預測靶基因的驗證。
　　方法:首

4、先檢測肝癌標本組織中miRNA17-92基因簇與肝細胞生長因子HPPCn的表達相關性及miRNA19a與預測靶基因PTEN，TNF的表達相關性;然后構建構包含靶基因3'-UTR的PGL-3M重組質粒，然后將重組質粒和miRNA19a模擬物共同轉入HEK293細胞，利用雙熒光素酶系統(tǒng)檢測miRNA19a是否調控PTEN，TNF的表達。
　　結果:我們發(fā)現肝癌標本中miRNA17-92與HPPCn的各基因簇表達具有一定相關性，尤其是與