脾氣虛證大鼠小腸神經、Cajal間質細胞和平滑肌細胞形態(tài)學變化和針刺足三里、天樞穴修復作用實驗研究.pdf

1、背景:脾氣虛證(syndrome of deficiency of spleen-qi，SDSQ)主要癥狀有納少，腹脹，便溏等，表現(xiàn)為胃腸運動功能障礙。改善胃腸動力有效地恢復消化道吸收、內分泌和免疫等功能，可有效防治脾氣虛證。Cajal間質細胞(interstitial cells of Cajal，ICC)參與胃腸運動調控，彼此連接形成網絡狀結構，廣泛分布在胃腸道肌層，是介于腸神經系統(tǒng)(enteric nervous system，E

2、NS)與平滑肌細胞(smooth muscle cell，SMC)之間的一類特殊細胞。腸神經釋放遞質作用于ICC，經過ICC的信息加工，傳遞給平滑肌，引起胃腸運動。ENS、ICC和SMC三者相互聯(lián)系，參與胃腸運動的調節(jié)。同時，臨床和動物實驗研究都表明針刺足三里和天樞穴可糾正胃腸運動功能紊亂，從而有效治療脾氣虛證。
　　目的:以脾氣虛大鼠模型為實驗對象，應用共聚焦顯微鏡和透射電鏡，觀察脾氣虛大鼠小腸ENS、ICC和SMC的形態(tài)學變化

3、以及針刺足三里穴和天樞穴修復作用的影響，探討脾氣虛證致胃腸運動障礙的產生機制及針刺足三里穴和天樞穴治療脾氣虛證的機理。
　　方法:選取清潔級成年Wistar大鼠60只，體重180g-220g，雌雄各半，隨機分組:
　?、僬φ战M（10只）;
　?、谄馓撟C組（10只）;
　　③自然恢復組（10只）;
　?、茚槾套闳镅ㄖ委熃M（10只）;
　?、葆槾烫鞓醒ㄖ委熃M（10只）;
　?、掎槾套闳?天

4、樞穴治療組（10只）。
　　正常對照組每只大鼠按照脾氣虛證組灌服等量生理鹽水，飲食不限。脾氣虛證大鼠動物模型建立依據(jù)陳小野的方法。針刺“足三里”和“天樞”。取各組大鼠上段小腸組織用于激光掃描共聚焦顯微鏡檢測。制作標本用于透射電鏡觀測。
　　結果:
　　1、胃腸大體形態(tài)觀察:
　　正常對照組:胃腸蠕動良好，腸管色澤紅潤，無擴張、水腫，形態(tài)完好。脾氣虛證組:腸管呈暗紅色，漿膜充血、水腫，胃腸蠕動波少見，針刺足三里穴治

5、療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組針灸治療后，腸管呈紅色，腸蠕動基本正常，粘膜水腫基本減退。
　　2、免疫熒光共聚焦顯微鏡檢測
　　(1)腸神經:正常對照組大鼠小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經纖維相互間的連接正常，形成完整的網絡狀結構。脾氣虛證組大鼠與正常對照組相比，PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經纖維數(shù)量均明顯減少(P＜0.05)，熒光IOD值明顯下降(P＜0.05)。自然恢復組

6、大鼠較之正常對照組，小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經纖維數(shù)量減少（P＜0.05），熒光IOD值下降(P＜0.05)，與脾氣虛證組無差異。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組較之脾氣虛證組和自然恢復組，小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經纖維數(shù)量明顯增多(P＜0.05)，細胞熒光IOD值明顯上升(P＜0.05)，與正常對照組無明顯差異，各針灸組之間無明顯差異。
　　(2)ICC

7、網絡:正常對照組大鼠小腸ICC相互間連接完好，ICC網絡結構正常。造模成功后，脾氣虛證組與正常對照組相比，ICC數(shù)量明顯減少，熒光IOD值均明顯下降(P＜0.05)，ICC網絡明顯受到破壞。自然恢復組較之正常對照組，小腸ICC數(shù)量減少，熒光IOD值均明顯下降（P＜0.05），ICC網絡受損，較之脾氣虛證組無明顯差別。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組較之于脾氣虛證組和自然恢復組，ICC數(shù)量明顯增加，熒光IO

8、D值均明顯上升(P＜0.05)，ICC網絡基本保持完整，與正常對照組無明顯差異，各針灸組之間無明顯差異。
　　(3)SMC:正常對照組SMC結構正常。造模成功后，脾氣虛證組與正常對照組相比，SMC熒光IOD值均明顯下降(P＜0.05)，SMC結構明顯受到破壞。自然恢復組較之正常對照組，小腸SMC熒光IOD值均明顯下降(P＜0.05)，SMC結構受損，較之脾氣虛證組無明顯差別。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞

9、穴治療組較之于脾氣虛證組和自然恢復組，SMC熒光IOD值均明顯上升(P＜0.05)，SMC結構基本保持正常，與正常對照組無明顯差異，各針灸組之間無差別。
　　3、透射電鏡觀測
　　ICC超微結構:正常對照組ICC體積小，多呈星形或梭形，細胞核較大，細胞質少，含有豐富的細胞器。脾氣虛證組ICC減少，胞漿內細胞器數(shù)量明顯減少，細胞質電子密度不均，細胞核皺縮。細胞結構明顯受損。自然恢復組ICC胞漿內細胞器數(shù)量較正常對照組減少，細胞

10、核電子密度不勻，形態(tài)結構紊亂。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組ICC胞漿內細胞器數(shù)量較多，形態(tài)結構較為清楚，細胞核基本正常。
　　結論:(1)脾氣虛時，大鼠小腸充血水腫，小腸動力功能障礙;針刺足三里穴及天樞穴治療能夠顯著減輕小腸充血水腫，改善小腸功能。
　　(2)脾氣虛時，小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經纖維數(shù)量明顯減少，腸神經網絡結構破壞嚴重;針刺足三里穴及天樞穴能夠減輕腸神