1-磷酸鞘氨醇對人耐受型樹突狀細胞功能影響的初步研究.pdf

1、本文基于對人外周血單核細胞來源的耐受型樹突狀細胞(tolerogenicdendritic cells，tDC)的免疫耐受功能和1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate，S1P)的生理作用進行研究，首次闡述了S1P在體外對人tDC免疫學功能的影響。
　　 未成熟樹突狀細胞(immature dendritic cells，iDC)可作為一種發(fā)揮免疫耐受功能的DC在移植物抗宿主病中發(fā)揮重要作用。但是越來越多的

2、研究者發(fā)現(xiàn)，tDC在移植物排斥和多種自身免疫性疾病中能更好地發(fā)揮耐受功能。本實驗用流式細胞術和RT-PCR的方法分別檢測tDC CD209、HLA-DR、CD80、CD83、CD86幾種表型分子的表達以及細胞內IL-10、TGF-β、Fas-L、IDO、IL-12p40以及TNF-amRNA的表達。結果顯示該tDC高表達HLA-DR、DC標志CD209、以及發(fā)揮免疫抑制功能的IL-10、TGF-B、Fas-L、IDO的mRNA，低表達成

3、熟標志CD83和共刺激分子CD80、CD86以及兩種炎性細胞因子IL-12p40和TNF-a mRNA。在表型上屬于一種未成熟DC。
　　 目前鑒于對S1P影響免疫系統(tǒng)功能研究的逐步深入，S1P對免疫系統(tǒng)中重要的細胞亞群tDC的影響引起了我們的興趣。本實驗用RT-PCR檢測的方法證明tDC表達S1P受體1，2，5，不表達受體3和4且S1P受體1和受體2 mRNA的表達均明顯高于S1P受體5。流式方法檢測出10-5M的S1P會引起

4、tDC細胞內明顯的Ca2+流的增加。Ca2+的變化提示我們S1P確實能與tDC表面的受體結合導致tDC的活化。S1P作用于tDC后，其表型和炎性細胞因子IL-12p40和TNF-a mRNA的表達無明顯變化，仍處于未成熟狀態(tài)，卻上調了發(fā)揮免疫抑制功能的IL-10、TGF-β和Fas-LmRNA的表達。因此進一步用Western Blot方法證明了S1P會導致細胞內信號蛋白ERK磷酸化水平發(fā)生變化：S1P在一定濃度范圍內增強ERK磷酸化水