丙泊酚對大鼠神經干細胞增殖和遷移的調控.pdf

1、目的：
　　觀察丙泊酚對懷孕15天(E15)大鼠大腦皮層神經干細胞(NSCs)增殖和遷移的影響并探討問題其可能機制。
　　方法：
　　1、分離E15天SD大鼠大腦皮層進行神經干細胞原代培養(yǎng)。以(1-2)*106/ml細胞密度接種，在含有2％ B27，20ng/ml bFGF，20ng/ml EGF的DMEM/F12的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并穩(wěn)定傳至第三代。用Nestin細胞免疫化學染色法鑒定神經干細胞，Nestin陽性率大于9

2、5％，表示傳至第三代的細胞仍為神經干細胞。
　　2、將原代培養(yǎng)至第三代的神經干細胞隨機分為4組:空白組，終濃度為0.1％的DMSO組，丙泊酚終濃度為20與50uM組，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)12h。
　　3、取分組的神經干細胞，經藥物處理培養(yǎng)2小時后，加入終濃度為10μ M的Edu，繼續(xù)培養(yǎng)4小時后進行Edu免疫熒光染色，用Edu的陽性率檢測神經干細胞的增殖能力。
　　4、取分組的神經干細胞，經藥物處理培養(yǎng)6小時后，收集神

3、經干細胞按照Tirzal試劑的說明書提取各組細胞的總RNA，再將其逆轉錄為cDNA后，采用熒光實時定量聚合酶鏈反應法（Real-Time PCR）檢測各組樣本中Stat3、Sox2和Notch1 mRNA的含量。
　　5、取分組的神經干細胞，經藥物處理培養(yǎng)6小時后，收集各組神經干細胞并提取總蛋白，采用Western blotting法檢測Stat3及p-Stat3蛋白含量的表達;
　　6、取分組的神經干細胞，經藥物處理培養(yǎng)6

4、小時后，將神經干細胞接種到Transwell板中，用遷移至小板下室的細胞數量表示神經干細胞的遷移能力。
　　結果：
　　1、與空白組相比，Edu免疫熒光染色檢測結果表明，丙泊酚組促進了神經干細胞增殖能力(P＜0.05);
　　2、與空白組相比，qPCR檢測結果發(fā)現(xiàn)，丙泊酚組Stat3與Sox2 mRNA的含量上升顯著(P＜0.05);
　　3、與空白組相比，Western blotting檢測結果表明，丙泊酚組p