中藥皂苷的抗糖尿病活性篩選和藥效學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　建立以高血糖、氧化損傷、胰島素抵抗和胰島素分泌缺陷為主要特征的大鼠2型糖尿病模型(Type2DiabetesMellitus，T2DM)，篩選11種中藥總皂苷的抗氧化、清除自由基、抗糖基化、抑制α-淀粉酶和促進胰島βTC3細胞分泌胰島素的活性，活性最優(yōu)的用于大鼠T2DM模型，觀察其對氧化損傷和T2DM相關(guān)指標的影響，并對其化學(xué)成分進行分離純化，對分離得到的化合物進行抗糖尿病(diabetesmellitus，DM)活性

2、篩選。
　　方法：
　　1.總皂苷的藥理活性篩選。常規(guī)方法提取中藥總皂苷，并利用香草醛-硫酸比色法檢測總皂苷的含量。通過檢測11種中藥總皂苷對ascorbate/Fe2+、過氧基異丙苯(cuminehydroperoxide,CHP)和CCl4/還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reducedformofnicotinamideadeninedinucleotidephosphate，NADPH)誘導(dǎo)的大鼠肝臟微粒體脂質(zhì)過氧化

3、的抑制程度來評價其抗氧化能力。通過檢測總皂苷對2,2′-二苯基-1-苦肼基(2,2′-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的清除率，評價總皂苷清除自由基的能力。通過特異性的δ-葡萄糖酸內(nèi)酯(δ-gluconolactone,δ-Glu)實驗、牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)-葡萄糖實驗和N-乙酰-甘氨酰-賴氨酸甲酯(N-acetyl-glycyl-lysinemethylest

4、er,GK)-核糖實驗比較中藥總皂苷對不同階段糖基化反應(yīng)形成的抑制作用。通過檢測麥芽糖的濃度評價中藥總皂苷對α-淀粉酶的作用。通過檢測胰島βTC3細胞釋放胰島素的量評價中藥總皂苷刺激胰島β細胞釋放胰島素的活性。
　　2.大鼠T2DM模型的復(fù)制。給予大鼠高脂高糖除抗氧化劑飼料聯(lián)合小劑量多次注射鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ)，誘導(dǎo)大鼠T2DM模型。公式計算胰島素敏感指數(shù)判斷胰島素抵抗，胰腺灌流技術(shù)判斷胰島素分泌情況。<

5、br>　　3.楤木總皂苷對大鼠T2DM的藥效學(xué)研究。分別按62.5mg/kg、125.0mg/kg和250.0mg/kg的劑量灌胃給予活性最優(yōu)的總皂苷(一天一次)治療T2DM大鼠30天，檢測血清、肝臟、骨骼肌和脂肪組織的相關(guān)氧化損傷指標，取胰腺做病理學(xué)評價。
　　4.楤木總皂苷中化學(xué)成分的分離及藥理活性篩選。采用硅膠柱色譜和制備型高效液相色譜(highperformanceliquidchromatography,HPLC)等分離

6、技術(shù)，對活性最優(yōu)的總皂苷的化學(xué)成分進行了分離純化，借助波譜技術(shù)對分離到的化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定，并通過體外及大鼠活體組織實驗?zāi)Ｐ蛯衔锏目寡趸?、清除自由基、抗糖基化和促進胰島βTC3細胞分泌胰島素的活性進行篩選。
　　1.總皂苷的藥理活性篩選。楤木中總皂苷的含量最高，約為45.93％(w/w)，本研究考察的11種中藥總皂苷具有不同的藥理活性，綜合各方面因素評價，楤木總皂苷將作為重點藥物進行進一步的分離鑒定。
　　2.大鼠T2D

7、M模型的復(fù)制。通過給予大鼠高脂高糖除抗氧化劑飼料，使其處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，大鼠機體氧自由基生成增加，抗氧化能力減弱，脂質(zhì)過氧化作用加強，導(dǎo)致胰島素抵抗，再聯(lián)合小劑量多次注射STZ，誘發(fā)了胰島素分泌缺陷和高血糖。
　　3.楤木總皂苷對大鼠T2DM的藥效學(xué)研究。不同劑量的楤木總皂苷能不同程度地改善T2DM大鼠的氧化損傷情況，楤木總皂苷雖未能將T2DM大鼠的血糖降至正常水平，但是250.0mg/kg劑量的楤木總皂苷能使T2DM大鼠的血糖水

8、平明顯下降，與T2DM模型組相比有顯著性差異(P<0.05)，形態(tài)學(xué)實驗表明給予楤木總皂苷后，光鏡下T2DM大鼠胰腺有逐步恢復(fù)的趨勢，但是胰島功能卻沒有明顯的改善。
　　4.楤木總皂苷中化學(xué)成分的分離及藥理活性篩選。從楤木總皂苷中分離出了12個化合物，其中TA35在體外具有很強的抗糖基化和刺激胰島βTC3細胞釋放胰島素的作用。
　　結(jié)論：
　　系統(tǒng)研究了11種臨床常用的中藥總皂苷的抗T2DM活性，綜合各方面因素評價，楤

9、木總皂苷可能是具有潛在應(yīng)用價值的T2DM治療藥物；本研究復(fù)制的T2DM模型雖然還不能完全反映人類T2DM進展的復(fù)雜過程，但至少對氧化應(yīng)激在T2DM發(fā)生發(fā)展中的作用有了進一步的認識；楤木總皂苷能改善T2DM大鼠的氧化損傷并具有一定的降糖作用，其對T2DM的治療作用還需進一步探討；從楤木總皂苷中分離出的化合物TA35在體外具有很強的抗糖基化和刺激胰島βTC3細胞釋放胰島素的作用。通過本課題的研究，對氧化應(yīng)激在T2DM發(fā)生發(fā)展中的作用有了更深