PAR2和TLR4對結腸癌細胞SW620增殖與遷移的促進作用及其機制初探.pdf

1、目的：觀察蛋白酶激活受體2(protease-activated receptors2，PAR2)和Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)在結腸癌細胞SW620的表達；分析PAR2和TLR4對SW620細胞增殖與遷移的促進作用并探討其可能機制。
　　 方法：
　　 (1)采用RT-PCR和western blotting檢測SW620細胞在基礎狀態(tài)下PAR2和TLR4 mRNA和蛋白表達；以

2、實時熒光定量PCR和流式細胞儀檢測PAR2激動劑(PAR2-AP)激活PAR2后細胞TLR4 mRNA和蛋白表達，同時檢測脂多糖(LPS)激活TLR4后細胞PAR2 mRNA和蛋白水平，從而分析PAR2和TLR4之間是否能夠相互誘導表達。
　　 (2)采用PAR2-AP、LPS、PAR2-AP/LPS以及抗PAR2抗體、紫衫醇(paclitaxel)等刺激物或抑制物處理SW620細胞，流式細胞儀檢測細胞周期時相分布，transw

3、ell法檢測細胞遷移能力，分析PAR2和TLR4對SW620細胞增殖與遷移的促進作用，并觀察兩受體間有無協(xié)同作用。
　　 (3)SW620細胞經(jīng)PAR2-AP、LPS、PAR2-AP/LPS等作用后，westem blotting檢測細胞p38MAPK、ERK1/2磷酸化水平，實時熒光定量PCR檢測細胞IL-8、TF、caspase-7 mRNA表達；進一步以ERK1/2抑制劑(U0126)處理SW620細胞，然后觀察PAR2-

4、AP、LPS、PAR2-AP/LPS對細胞IL-8、TF、caspase-7表達的影響，初步探討PAR2和TLR4促進SW620細胞增殖與遷移的分子機制。
　　 結果：
　　 (1)SW620細胞在基礎狀態(tài)下表達PAR2和TLR4 mRNA和蛋白；PAR2被活化后細胞TLR4 mRNA表達明顯上調(diào)，但其蛋白表達僅輕微增加；TLR4被活化后細胞PAR2 mRNA表達增加明顯，而其蛋白表達升高不顯著。
　　 (2)P

5、AR2和TLR4的分別活化均能使SW620細胞S期比率升高，G1期細胞所占比例相應下降，細胞遷移數(shù)增加，且PAR2和TLR4同時活化的促進作用更明顯，抗PAR2抗體和paclitaxel均可抑制此作用。
　　 (3)PAR2和TLR4活化均能使SW620細胞ERK1/2磷酸化增強，而p38MAPK磷酸化水平變化不明顯；另外，PAR2和TLR4活化還上調(diào)細胞IL-8、TF mRNA表達，下調(diào)caspase-7 mRNA表達；且ER

6、K1/2抑制劑(U0126)可阻斷PAR2和TLR4對SW620細胞IL-8、TF、caspase-7 mRNA表達的調(diào)控。
　　 結論：
　　 (1)SW620細胞基礎狀態(tài)表達PAR2和TLR4 mRNA和蛋白，且兩受體能相互誘導表達，但mRNA和蛋白變化不一致。
　　 (2)PAR2和TLR4激活均能促進SW620細胞增殖與遷移，且兩受體間具有協(xié)同作用。
　　 (3)PAR2和TLR4均能增強SW62