綠粘帚霉產幾丁質酶的條件優(yōu)化及其酶學性質研究.pdf

1、綠粘帚霉fGliocladium virens)對多種病原菌都具有拮抗活性，是一種潛力巨大的生防菌，在林木病蟲害的生物防治中起著重要作用。國內有關綠粘帚霉產幾丁質酶及其生防特性的研究較少，大多為對綠粘帚霉的重寄生、競爭作用以及抗菌代謝產物膠霉毒素的研究。就此，本研究以綠粘帚霉F051菌株為對象，研究綠粘帚霉F051產幾丁質酶的最佳碳、氮源以及最優(yōu)培養(yǎng)條件；分離純化幾丁質酶并對幾丁質酶學性質及其對三種病原真菌交鏈孢、鐮刀菌和立枯絲核菌菌絲

2、細胞壁的降解作用進行研究。研究結果如下： 還原糖法測定，綠粘帚霉F051發(fā)酵上清液與膠態(tài)幾丁質混合，再與.DNS反應后，產生棕紅色物質，說明有幾丁質酶的存在，即綠粘帚霉F05l可產生幾丁質酶。綠粘帚霉F051只有在含有幾丁質誘導物的培養(yǎng)基中發(fā)酵才能產生幾丁質酶，說明綠粘帚霉F051產生的幾丁質酶是一種誘導酶。 在葡萄糖，蔗糖，麥芽糖，乳糖四種碳源， (NH<,4>)<,2>SO<,4>，NH<,4>NO<,3>，蛋白胨，

3、酵母粉四種氮源中，經測定，麥芽糖和酵母粉分別為碳源和氮源時，綠粘帚霉所產幾丁質酶活最大，即麥芽糖和酵母粉為產幾丁質酶的最佳碳、氮源。 綠粘帚霉F051產幾丁質酶的條件優(yōu)化，通過正交試驗測定了溫度、pH值、瓶裝量、接種量、碳源和氮源的量對產酶的影響。研究表明碳源的量對綠粘帚霉F051產幾丁質酶的影響最大，其次是溫度，再次是瓶裝量；當溫度為28℃，pH值等于7， 100mL的瓶裝量，接種1mL孢懸液且碳源和氮源的量分別為1.5％和0

4、.2％時幾丁質酶活力最大，為產酶的最佳條件。 通過60％硫酸銨沉淀分離，再經High Q陽離子交換柱層析純化幾丁質酶，經SDS-PAGE測定，該幾丁質酶分子量約為40KD。 對幾丁質酶酶學性質的研究表明，在20～80℃范圍內，幾丁質酶的最適反應溫度為50℃，隨后溫度升高幾丁質酶活迅速下降；該酶在20～40℃水浴中保溫1h后，酶活基本穩(wěn)定，超過這個溫度酶活逐漸下降，80℃保溫1h酶活完全喪失。當pH=4時酶活最大；在pH2

5、～8的不同緩沖液中預處理lh，幾丁質酶在pH3～8范圍內基本保持穩(wěn)定。金屬離子中Ba2<'2+>、Mn<'2+>、Sn<'2+>對幾丁質酶有激活作用Sn<'2+>作用最強；Na<'+>、K<'+>、Mg<'2+>、Ca2+、Fe<'2+>對幾丁質酶有抑制作用，Fe<'2+>完全抑制幾丁質酶活。不同濃度的有機溶劑處理幾丁質酶，5％和20％的丙酮，5％的乙二醇和正丙醇對幾丁質酶有激活作用，其余有機溶劑均對該酶有抑制作用。 幾丁質粗酶