肝郁脾虛證的模型復制及相關方劑作用的生物學基礎.pdf

1、本研究首先依據中醫(yī)關于肝郁脾虛證的發(fā)病學說、臨床表現和其涉及到某些現代疾病的生病理變化特點，探索運用復合病因造模法復制出肝郁脾虛證大鼠模型，通過神經-內分泌-免疫系統(tǒng)中的多指標觀察，以獲得模型的中醫(yī)證候及部分生物學特點；在此基礎上，比較觀察具有疏肝、健脾和疏肝健脾功用的柴胡疏肝散、四君子湯和柴疏四君湯三方對該肝郁脾虛證模型的作用異同，探討異方同證條件下的三方效用與病證模型之間的關聯性和關聯的部分現代生物學基礎。故本課題以研究不同方劑與同

2、一對應主治證之間的關系為切入點，為進一步揭示和探索“方證相關”這一邏輯命題提供實證依據。 論文分為文獻綜述和實驗研究兩部分。文獻綜述部分主要對肝郁脾虛證的臨床與實驗研究進展、柴胡疏肝散、四君子湯及柴疏四君湯的臨床與實驗研究進展進行了綜述。實驗研究部分主要從肝郁脾虛證模型的神經-內分泌-免疫網絡、胃腸功能的變化、柴胡疏肝散、四君子湯及柴疏四君湯對模型神經-內分泌-免疫網絡、胃腸功能變化的影響及柴疏四君湯對模型甲狀腺軸、能量代謝、血

3、循環(huán)變化的調節(jié)作用三方面進行了探討。 研究一：肝郁脾虛證模型的建立 方法：將大鼠隨機分為正常組和肝郁脾虛模型組，每組40只。模型組大鼠采用慢性束縛應激+過度疲勞+飲食失節(jié)法造模，將大鼠于每天上午8：00置于束縛盒中限制3小時，下午2：00置于盛有溫水(22±1℃)的大塑料桶中游泳10分鐘。隔日喂食(隔日禁食，隔日足量給食)，連續(xù)3周。然后停止造模自然恢復一周。分別于造模的第一、二、三、四周取材，用鄰-甲苯胺法測尿D-木糖

4、排泄率，用高效液相色譜-電化學法檢測單胺神經遞質，用試劑盒放免法檢測血清GAS、IL-1β、IL-2、IL-6、TNF；血漿MTL、SS、VIP、ACTH、CORT；下丘腦CRH的含量。 結論：該模型大鼠表現出部分類似肝郁脾虛證的癥狀，存在小腸吸收功能障礙、中樞單胺類遞質和胃腸功能、免疫系統(tǒng)、HPA軸功能的紊亂。結果提示本模型符合中醫(yī)肝郁脾虛證且存在胃腸功能紊亂和神經-內分泌-免疫網絡中多環(huán)節(jié)的調節(jié)障礙。 研究二：柴胡疏

5、肝散、四君子湯、柴疏四君湯對肝郁脾虛證模型的作用 方法：將大鼠隨機分為2組：正常組(20只)，造模組(50只)，造模組大鼠按上述制模方法處理三周。于造模第三周末分別從正常組和模型組隨機各取大鼠10只取材。第四周停止造模，造模組動物隨機分成肝郁脾虛模型(gypx)、柴胡疏肝散(Chsgs)，四君子湯(Sjzt)、柴疏四君湯(Cssjt)四組，每組10只。中藥三組分別按1ml·100g-1體重給予柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯灌胃

6、，連續(xù)7天，每日1次。模型組和對照組分別給予等量蒸餾水。用HE染色觀察肝細胞病理變化，用硝基四氮唑藍法觀察肝細胞琥珀酸脫氫酶的變化，余檢測方法同研究一。 結論：肝郁脾虛模型使大鼠神經-內分泌-免疫網絡、胃腸功能、肝細胞線粒體功能異常改變，柴疏四君湯在調節(jié)肝郁脾虛模型神經內分泌免疫、胃腸功能、肝細胞線粒體功能異常改變方面優(yōu)于柴胡疏肝散和四君子湯。 研究三：柴疏四君湯對肝郁脾虛大鼠模型的其他作用 方法：將大鼠隨機分為

7、正常組(20只)和模型組(20只)。模型組按上述方法制模，于造模第三周末分別從正常組和模型組隨機各取大鼠10只取材，第四周停止造模，造模組動物隨機分成肝郁脾虛模型(gypx)、柴疏四君湯(Cssjt)兩組，每組各10只。柴疏四君湯組按1ml·100g-1體重給予柴疏四君湯灌胃，連續(xù)7天，每日1次。模型組和對照組分別給予等量蒸餾水。用放免法檢測血漿TXB2、6-keto-PGF1a、血清TSH、T3、T4，用比色法檢測血清Na+-K+-A

8、TP酶，用高效液相法檢測肝組織能荷，用血液粘度測試儀檢測血流變。 結論：肝郁脾虛證模型存在甲狀腺功能、能量代謝、血流變學及TXA2-PGI2平衡的異常改變。柴疏四君湯可通過改變這些異常狀態(tài)而對肝郁脾虛模型進行調節(jié)。 本課題觀察到采用慢性束縛應激+過度疲勞+飲食失節(jié)法建立肝郁脾虛證模型，出現了胃腸功能、神經內分泌免疫、血循環(huán)、能量代謝及肝細胞病理改變，獲得了肝郁脾虛證的某些生物學特點，為評價肝郁脾虛證模型提供了一定的實驗依