苦苣苔科植物牛耳朵化學成分及其活性研究.pdf

1、牛耳朵(Chirita eburnea Hance)是苦苣苔科(Gesneriaceae)唇柱苣苔屬(Chirita)植物牛耳朵的全草,別名為石三七、石虎耳等,為廣西民間常用藥材,主產廣西、廣東、湖南、湖北、四川及貴州等地。牛耳朵根莖或全草入藥,性味甘、平,有清肺、止血、止咳、除濕、解毒、治肺結核等功用,廣西民間廣泛用來治療肺結核、高血壓等疾病。但由于缺乏系統的理論基礎研究,現階段對牛耳朵的利用僅限于民間草藥,其藥用價值沒能很好開發(fā)。本

2、課題擬選擇廣西民間草藥牛耳朵為研究對象,對其進行系統的化學成分研究,并研究部分單體成分的體外抗腫瘤活性。為進一步開發(fā)利用該草藥資源奠定藥用化學物質基礎,也為牛耳朵藥材及其提取物質量控制提供科學依據。具體研究內容和取得的成果如下。
　　1.牛耳朵中脂溶性非極性成分研究首次采用氣相色譜-質譜聯用技術對牛耳朵脂溶性非極性易揮發(fā)成分進行分析,結合質譜離子圖及NIST05a.L化合物譜庫檢索對分離出的組分進行鑒定,并應用面積歸一化法測定各組

3、分的相對百分含量,共分離出30個組分,鑒定其中24個組分,占總量的87.38％。牛耳朵脂溶性主要成分為:亞油酸乙酯(10.86%),油酸乙酯(9.46%),十四烷酸乙酯(9.15%),β-谷甾醇(6.99%),n-棕櫚酸(4.89%)。
　　2.牛耳朵極性化學成分的研究對牛耳朵極性化學成分進行系統研究。利用溶劑萃取、柱層析分離和液相制備等方法從牛耳朵全草極性部位中分離得到11個化合物,并經質譜(MS)、核磁共振譜(1H-NMR、1

4、3C-NMR)等光譜技術及化學方法鑒定了其中9個化合物。分別為:β-谷甾醇(CE-1)、1-羥基-2-甲氧基-7-甲基蒽醌(Peganone 2)(CE-2)、1,7-二羥基-6-甲氧基-2-甲基蒽醌(Robustaquinone D)(CE-5)、5,7,4′-三羥基黃酮(芹菜素,Apigenin)(CE-6)、3,4-二羥基苯乙醇-3-O-咖啡?；?β-D-葡萄糖苷(Plantainoside Α)(CE-7)、3,4-二羥基苯乙醇

5、-6-O-葡萄糖咖啡酰基-β-D-葡萄糖苷(Chiritoside C)(CE-8)、3,4-二羥基苯乙醇-2-O-咖啡酰基-β-D-葡萄糖苷(Plantaninoside B)(CE-9)、3,4-二羥基苯乙醇-β-D-葡萄糖(1→3)-4-O-咖啡?；?β-D-葡萄糖苷(Plantamajoside)(CE-10)、3,4-二羥基苯乙醇-4-O-咖啡?；?β-D-葡萄糖苷(Desrhamnosylverbascoside)(CE-1

6、1)?；衔镱愋蜕婕坝斜揭掖架疹?、蒽醌類、甾醇類。其中化合物CE-7、CE-8、CE-9、CE-10、CE-11為苯乙醇苷類成分;CE-2、CE-5為蒽醌類成分;CE-6為黃酮;CE-1為甾醇。化合物CE-5、CE-10首次從該科植物中分離得到,化合物CE-1、CE-2、CE-6、CE-7、CE-8、CE-9、CE-11均為首次從該植物中分離得到。
　　3.苯乙醇苷類單體化合物的高效液相色譜制備方法研究采用MCI柱層析預處理和半制

7、備型反相高效液相色譜法從牛耳朵中分離制備得到了5種苯乙醇苷類單體。高效液相制備條件為:Eclipse XDB-C18(9.4×250 mm,5μm)半制備柱;流動相為甲醇-水,流速為4 ml/min,采用梯度洗脫方式,制備得到5個組分。經波譜(EI-MS、1H-NMR、13C-NMR)分析,分別鑒定為PlantainosideΑ(CE-7)、Chiritoside C(CE-8)、Plantaninoside B(CE-9)、Plant

8、amajoside(CE-10)和Desrhamnosylverbascoside(CE-11)。高效液相色譜分析表明所制備的5種化合物的純度均高于98%。該方法分離條件簡單,高效,一次可得到5個單體,目標產物純度較高。
　　4.建立能同時檢測牛耳朵中4種苯乙醇苷類的含量測定方法。以50%甲醇為溶劑,采用超聲提取法制備樣品。采用ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱;流動相為乙睛和水(含0.05%冰

9、醋酸),梯度洗脫;流速1 ml/min;檢測波長為330 nm;柱溫30℃。結果表明:4種苯乙醇苷類化合物Plantainoside A、Chiritoside C、Plantaninoside B和Desrhamnosylverbascoside在1.0～8μg、0.4～3.2μg、0.4～3.2μg、0.4～3.2μg之間線性關系良好,樣品在72 h內穩(wěn)定,精密度、重現性均符合檢測要求,且樣品處理簡單,分析檢測時間短,可適用于牛耳朵

10、原料及其提取物的質量控制。
　　5.單體化合物的細胞毒活性研究對分離得到的8個單體化合物CE-2、CE-4、CE-5、CE-6、CE-7、CE-8、CE-9、CE-10、CE-11進行體外抗腫瘤活性(細胞毒性)的測試。實驗結果發(fā)現,化合物CE-4對人肺大細胞癌細胞株NCI-H460有較強的細胞毒性,半數抑制濃度IC50為34.2μg/ml;化合物CE-5對人肺癌細胞株SPC-A1有中等強度的細胞毒性,半數抑制濃度IC50為50.1