枸杞多糖對精原干細胞體外增殖的影響.pdf

1、背景：隨著男性不育的逐年增加，精原干細胞研究在男性生殖健康領域展現(xiàn)出廣闊的應用前景，采用精原干細胞移植的方法來治療非梗阻性無精子癥具有潛在的臨床應用價值，尤其給青春期前接受大劑量化療或放療所致不育的患者及其家庭帶來了希望。建立有效的精原干細胞體外培養(yǎng)方法，獲得數(shù)量足夠、純度較高的精原干細胞是進行精原干細胞有效移植的基礎，精原干細胞的體外增殖培養(yǎng)仍是精原干細胞研究中的熱點之一。盡管近些年來對精原干細胞體外培養(yǎng)方法的研究取得了一些進展，但至

2、今仍然未建立一種簡單有效的體外培養(yǎng)方法。因此，如何建立一種迅速、有效的精原干細胞體外培養(yǎng)方法仍是目前精原干細胞研究中亟待解決的問題之一。
　　目的：探討枸杞多糖對精原干細胞體外增殖培養(yǎng)效果的影響。
　　方法：取出生后4～6 d的雄性 C57 BL/6小鼠，采用機械分離與兩步酶消化法從睪丸組織中獲取 Sertoli細胞與精原干細胞，建立 Sertoli細胞飼養(yǎng)層，將精原干細胞接種在 Sertoli細胞飼養(yǎng)層上體外共培養(yǎng)，并將枸

3、杞多糖（LBP）及細胞因子按實驗分組要求分別添加到細胞培養(yǎng)液中。按照培養(yǎng)液不同實驗分為3組，A組：培養(yǎng)液為 DMEM/F12－C，B組：DMEM/F12－C培養(yǎng)液+100 ug/ml LBP， C組：DMEM/F12－C培養(yǎng)液+100 ug/ml LBP+10 ng/ml膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子（GDNF）+1000 U/ml白血病抑制因子（LIF）。細胞原代培養(yǎng)一周后，以流式細胞儀檢測細胞活性率及細胞周期，并以 GFRa-1、Thy-

4、1、c-kit作為標志物，分別檢測各組精原干細胞的陽性表達率。
　　結果：通過流式細胞儀檢測細胞活性率，采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行 t檢驗和單因素方差分析，A組為（63.42±4.24）％， B組為（87.16±0.88）％，C組為（97.27±1.59）％,各組間差異有統(tǒng)計學意義(均 P<0.05)；以流式細胞儀檢測細胞周期，A組 S期細胞為（11.61±0.99）％，B組為（16.38±0.78）％， C組為（16.59

5、±0.74）％, A組較B組及C組低，差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，但 B組與 C組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。以 GFRa-1為標志物檢測各組精原干細胞陽性率，A組為（6.43±1.63）％，B組為（11.07±1.31）％，C組為（22.0±0.41）％,各組間差異有統(tǒng)計學意義(均 P<0.05)；以 Thy-1為標志物檢測各組精原干細胞陽性率，A組為（29.89±0.53）％，B組為（36.85±0.64）％， C組

6、為（43.42±1.71）％,各組間差異有統(tǒng)計學意義(均 P<0.05)；以 c-kit為標志物檢測各組精原干細胞陽性率， A組為（7.97±0.32）％， B組為（9.74±2.23）％，C組為（16.77±1.71）％, C組較 A組及B組明顯高，差異有統(tǒng)計學意義(均 P<0.05)，但 A組與 B組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論：將精原干細胞與 Sertoli細胞體外共培養(yǎng)，在枸杞多糖或枸杞多糖聯(lián)合膠質細胞源性神經營養(yǎng)因