hTPO和hNIS共轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞介導(dǎo)放射性碘治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：構(gòu)建含有人甲狀腺過(guò)氧化物酶基因（hTPO）的重組腺病毒AdTPO，并將AdtTPO和人鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體基因（hNIS）分別轉(zhuǎn)入膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251中，獲得穩(wěn)定表達(dá)hTPO和hNIS基因的細(xì)胞系hNIS-AdTPO-U251和hNIS-U251，在125I的作用下研究細(xì)胞的攝碘能力及攝碘時(shí)間。 方法：克隆，重組，包裝并擴(kuò)增純化得到重組腺病毒（AdTPO），并且測(cè)定病毒滴度，Western-Blotting檢測(cè)重組腺病毒的表達(dá)。鑒定

2、已構(gòu)建好的重組質(zhì)粒（pcDNA3.1-hNIS）。使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將hNIS基因轉(zhuǎn)染入人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251中，經(jīng)過(guò)G418抗生素篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)hNIS的細(xì)胞系，為陰性對(duì)照組（hNIS-U251）；使用重組腺病毒將hTPO基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入L1251中，使膠質(zhì)瘤細(xì)胞獲得hTPO基因，為實(shí)驗(yàn)組（AdTPO-hNIS-U251）。未轉(zhuǎn)入hTPO和hNIS的細(xì)胞為空白對(duì)照組（U251）。進(jìn)行感染后穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的體外攝125I實(shí)驗(yàn)，體外125I外流

3、實(shí)驗(yàn)，體外125 I內(nèi)流實(shí)驗(yàn)，過(guò)氯酸鹽抑制實(shí)驗(yàn)，125I有機(jī)化測(cè)定試驗(yàn)，細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)等。 結(jié)果： 1.hNIS在U251細(xì)胞中有瞬時(shí)表達(dá)，轉(zhuǎn)染了hNIS的U251細(xì)胞比未轉(zhuǎn)染hNIS的空白組攝125I能力增高約4倍左右（P<0.01）。 2.通過(guò)重組腺病毒感染已經(jīng)穩(wěn)定表達(dá)hNIS基因的U251細(xì)胞系，將hTPO基因轉(zhuǎn)導(dǎo)至U251細(xì)胞后，hNIS聯(lián)合AdTPO共轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組的攝125I能力相比增高約147

4、倍左右（P<0.01），hNIS單獨(dú)轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組的攝碘能力相比增高約110倍（P<0.01）。 3.125I內(nèi)流的動(dòng)態(tài)演變實(shí)驗(yàn)證實(shí)125I在實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系中均快速聚集，約90-120min時(shí)達(dá)到穩(wěn)定階段。 4.125I外流的動(dòng)態(tài)演變實(shí)驗(yàn)證實(shí)陰性對(duì)照組中125I的有效半衰期為7min，實(shí)驗(yàn)組的125I外流減慢，其有效半衰期延長(zhǎng)至13min。 5.NaClO4抑制試驗(yàn)表明加入NaClO4的實(shí)驗(yàn)

5、組和陰性對(duì)照組的攝125I能力明顯受到抑制，攝碘能力均降低30倍左右（P<0.001）。 6.125I有機(jī)化測(cè)定試驗(yàn)證實(shí)hNIs和hTPO共轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞的有機(jī)化程度高于單獨(dú)hNIS轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞。 7.細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)131I孵育后實(shí)驗(yàn)組比未經(jīng)131I孵育的空白對(duì)照組的克隆形成率有所降低（P<0.01），約降低13倍左右；經(jīng)131I孵育后陰性對(duì)照組比未經(jīng)131I孵育的空白對(duì)照組的克隆形成率有所降低（P<0.01）