小麥抗葉銹病近等基因系TcLr10與Thatcher蛋白質組表達差異分析.pdf

1、小麥葉銹病是小麥生產(chǎn)上的一個重要病害，威脅和阻礙小麥生產(chǎn)。本研究利用雙向電泳技術分析TcLr10與Thatcher在未接種小麥葉銹菌，和接種后的蛋白質組差異。利用質譜技術對差異表達的蛋白質進行了肽質量指紋(Peptide MassFingerprinting PMF)分析。可以由此進一步分析這些蛋白質的氨基酸種類及其序列，為利用基因工程進行抗病育種提供重要依據(jù)。 本研究以小麥抗葉銹病近等基因系TcLr10和感病親本Thatche

2、r為材料，分別提取未接種和接種后的TcLr10和Thatcher的蛋白質組。對提取方法以及電泳條件進行了摸索，建立起了一套適合于小麥的蛋白質雙向電泳技術體系。用三氯乙酸/丙酮沉淀法提取小麥蛋白質組，用丙酮沉淀四次，得到質量較高的蛋白樣品。平衡過程采用兩步均為15min的平衡程序，可減輕第二向電泳中的蛋白質點縱向拖尾現(xiàn)象。 通過對未接種和接種后的Tclr10與Thatcher的蛋白質雙向電泳圖譜進行分析。結果發(fā)現(xiàn)了四個有差異的蛋白

3、點。對這四個點進行質譜分析，再進行數(shù)據(jù)庫查詢，結果找到了與之具有同源性的蛋白質，分析可能與抗病反應有關。 (1)蛋白質點a與H<'+>轉運ATPase的亞基1具有同源性，該酶位于質膜上，可能在信號轉導中發(fā)揮作用。質膜H<'+>-ATPase的主要作用是產(chǎn)生細胞膜兩側H<'+>的電化學梯度。 (2)蛋白質點b與RuBisCO大亞基結合蛋白具有同源性，是葉綠體分子陪伴蛋白，該蛋白是一種分子伴侶?？赡茉谛←溑c葉銹菌互作過程中起