乙肝病毒X蛋白(HBx)促進肝細胞增殖信號傳導途徑的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染與肝癌的發(fā)生具有十分密切的關系，HBVx基因開放閱讀框編碼的HBVX蛋白（HBx）在肝癌的發(fā)生發(fā)展和細胞增殖中具有十分重要的作用。然而，迄今為止HBx的致癌作用機理仍不十分清楚。為了進一步闡明HBx致癌作用的分子機制，我們對乙肝病毒X蛋白（HBx）促進肝細胞增殖的信號轉導途徑進行了研究。
　　 我們前期基因芯片檢測結果顯示，與H7402細胞相比，穩(wěn)定轉染HBx基因的肝

2、癌細胞H7402-X中與花生四烯酸代謝相關的基因表達明顯上調。因此，我們進一步通過Western blot檢測了花生四烯酸代謝酶cPLA2、COX-2和磷酸化p-ERK1/2在H7402-X細胞中的蛋白表達水平，并應用熒光素酶報告基因、流式細胞儀、BrdU摻入實驗檢測了H7402-X細胞的增殖能力。實驗結果顯示，p-ERK1/2、cPLA2和COX-2蛋白在H7402-X細胞中均有高表達。應用PTX（Gi/o蛋白抑制劑），Indo（AA

3、代謝酶COX-2抑制劑）和NDGA（LOX抑制劑）作用H7402-X細胞，可明顯下調p-ERK1/2的水平。此外，H7402-X細胞的條件培養(yǎng)液以濃度依賴方式上調H7402細胞中p-ERK1/2的水平，并且可促進H7402細胞的增殖能力，該作用也能被上述抑制劑抑制。我們還應用熒光素酶報告基因、流式細胞儀、BrdU摻入實驗驗證了此結果。為了進一步證實上述實驗結果，我們應用了另一個細胞系L-O2-X（穩(wěn)定轉染pCMV-X質粒的人永生化肝細胞

4、系），并與L-O2細胞進行比較，發(fā)現(xiàn)p-ERK1/2在L-O2-X細胞中的水平也很高，并且應用Gi/o蛋白的抑制劑（PTX）可下調p-ERK1/2的水平。L-O2-X細胞的條件培養(yǎng)液也可上調L-O2細胞中p-ERK1/2的水平，并受到Indo的抑制。上述結果提示，L-O2-X細胞增殖的信號途徑與H7402-X細胞相似。
　　 本研究發(fā)現(xiàn)乙肝病毒X蛋白（HBx）通過花生四烯酸代謝途徑促進肝細胞增殖的信號傳導途徑與cPLA2/花生四