從乳酸穿梭探究心肌缺血再灌注損傷的保護機制.pdf

1、第一部分：大鼠心肌缺血再灌注期間乳酸穿梭系統(tǒng)相關蛋白表達變化
　　【目的】研究大鼠心肌缺血再灌注過程中乳酸穿梭系統(tǒng)相關蛋白以及乳酸濃度的變化,并觀察心肌缺血再灌注損傷時是否存在乳酸穿梭現象。
　　【方法】雄性SPF級大鼠72只,分別采用Langendorff法和左冠狀動脈結扎法建立大鼠心肌缺血再灌注模型。根據缺血再灌注時間的不同隨機分為平衡灌注20min組,缺血30min組,復灌15min組和復灌60min組,留取各組心肌組

2、織,收集各組終末時間點的冠脈流出液或血液。RT-PCR法檢測各組心肌細胞MCT1,MCT4mRNA含量;Westernblot檢測MCT1,MCT4,CD147,AMPK,P-AMPK蛋白含量;Elisa法檢測心肌組織LDH含量并測定其活性;測定冠脈流出液或血清乳酸濃度。
　　【結果】兩種模型均顯示正常情況下心臟MCT1,MCT4均有表達,MCT4表達較少;缺血30min后,MCT4表達明顯增加,而MCT1表達基本無變化;再灌注1

3、5分鐘后,MCT1表達明顯增加,MCT4表達明顯下降;再灌注60min后MCT1,MCT4表達回歸缺血前水平。CD147及LDH在缺血30min和再灌注15min表達活躍。而AMPK在缺血30min和再灌注15min活化程度明顯增加。乳酸濃度在缺血30min后明顯增高,再灌注15min后濃度明顯下降至正常水平至60min結束。
　　【結論】心肌缺血時MCT4增多,乳酸濃度增高,再灌注時MCT1增多,乳酸濃度下降,缺血再灌注過程中乳

4、酸穿梭相關蛋白表達均活躍,MCT的表達增多伴隨著AMPK活化程度增加。心肌缺血再灌注期間存在乳酸穿梭。
　　第二部分：MCT介導的乳酸穿梭在大鼠心肌缺血再灌注期間的作用研究
　　【目的】通過右旋乳酸競爭性抑制心肌缺血再灌注過程中的乳酸穿梭,判斷乳酸穿梭在心肌缺血再灌注中的作用。
　　【方法】36只雄性SPF級大鼠,隨機分為正常缺血再灌注組(I/R組),左旋乳酸灌注組(L-LAC),右旋乳酸灌注組(D-LAC),采用La

5、ngendorff法建立心肌缺血再灌注模型,其中穩(wěn)定20min,停灌30min,復灌60min。L-LAC組和D-LAC組在缺血前5min各灌入100mML型或D型乳酸。觀察各組再灌注過程中血流動力學指標評估心肌機械功能恢復情況,灌注完畢后收集冠脈流出液,留取心肌組織,Elisa法檢測灌流液cTnI含量評價心肌損傷程度,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡情況,TTC法檢測心肌梗死范圍,心肌HE染色觀察心肌病理變化。
　　【結果】D-LA

6、C組再灌注過程中血流動力學指標的恢復情況明顯差于L-LAC和I/R組,而后兩組無明顯差異;D-LAC組灌流液中cTnI濃度明顯高于其他兩組;TUNEL測定結果顯示灌注結束后D-LAC組心肌組織陽性細胞數顯著增加,而后兩組無明顯差異,D-LAC組心肌凋亡增加;TTC結果顯示D-LAC組心肌梗死面積擴大,其他兩組無明顯差異。HE染色示D-LAC組心肌細胞水腫嚴重,心肌纖維斷裂,其他兩組心肌細胞排列大致緊密。
　　【結論】右旋乳酸阻斷心

7、肌缺血再灌注中的正常的乳酸穿梭使心肌功能惡化,心肌梗死面積增加,心肌細胞凋亡數目增多,損傷程度加重。乳酸穿梭對心肌缺血再灌注有保護作用。
　　第三部分：阿卡地新對大鼠心肌缺血再灌注乳酸穿梭的影響
　　【目的】觀察阿卡地新對心肌缺血再灌注期間MCT蛋白表達水平及心肌損傷的影響。
　　【方法】雄性SPF級大鼠48只,建立LANGENDORFF模型后,隨機分為兩組,一組為AICAR組,一組為對照組,AICAR組灌流液含2mm

8、ol/L的AICAR,其余成分同對照組。兩組離體心臟平衡20min后按缺血再灌注時間點又各分為缺血45min組,缺血45min后再灌注15min組和再灌注60min組三個亞組。留取各組心肌組織RT-PCR法檢測MCT1,MCT4mRNA水平,Westernblot檢測MCT1,MCT4,AMPK,及p-AMPK蛋白水平,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡,TTC法檢測心肌梗死。測定灌流液中LDH活性評價心肌損傷程度。
　　【結果】與對照