庫爾勒香梨SCoT反應體系優(yōu)化及優(yōu)良營養(yǎng)系鑒定.pdf

1、庫爾勒香梨原產(chǎn)庫爾勒地區(qū)，栽培時間久遠，具有品質(zhì)優(yōu)良、皮薄肉脆、汁豐味甜、香味濃郁、極耐儲藏的優(yōu)點，庫爾勒香梨的品質(zhì)優(yōu)良，近年來庫爾勒香梨已經(jīng)遠銷國內(nèi)外，成為庫爾勒地區(qū)主栽的經(jīng)濟作物之一。隨著分子生物技術的發(fā)展，運用分子技術輔助果樹新品種的選育和鑒定已經(jīng)成為一種趨勢。本實驗以庫爾勒香梨和2006-2009年期間從農(nóng)二師各大優(yōu)良庫爾勒香梨種植園選擇的脫萼型、豐產(chǎn)型、大果型優(yōu)良營養(yǎng)系為試材，運用SCoT分子標記方法，對實驗材料進行擴增，并克

2、隆測序，找到優(yōu)良營養(yǎng)系與對照材料之間的堿基差異，并對優(yōu)良營養(yǎng)系進行鑒定，為庫爾勒香梨的品種鑒定研究提供技術支持。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴試劑盒法和改良SDS法適合提取庫爾勒香梨基因組DNA，而試劑盒法提取的庫爾勒香梨基因組DNA最適合SCoT分析。⑵SCoT-PCR擴增程序和反應體系如下：反應程序：94℃預變性4 min；94℃45 s，50℃30 s，72℃1 min，循環(huán)30次；72℃8 min；16℃保存。擴增產(chǎn)物用1.

3、2％瓊脂糖凝膠電泳檢測。反應體系：20μL體系中包含10×buffer with Mg2+2.5μL，dNTPs1.6mmol·L-1，引物10μmol·L-1，Taq酶1.5U，DNA模板25ng。⑶從篩選出的20個引物中隨機選擇2條引物對24份材料擴增，用DNAMAN、Editseq、ORF Finder和NCBI-BLAST-tblastx對測序結(jié)果分析，結(jié)果表明擴增獲得的序列與沙梨、金冠蘋果、草莓、碧桃、釀酒葡萄等相關基因同源性