可溶性環(huán)氧化物水解酶抑制劑對脂肪細胞介導膽固醇逆轉(zhuǎn)運的影響.pdf

1、目的：
　　 用高膽固醇飲食喂養(yǎng)apoE-/-小鼠建立動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)模型，觀察可溶性環(huán)氧化物水解酶抑制劑(solubleepoxide hydrolase inhibitor, sEHi)-trans-4-[4-(3-adamantan-1-ylureido)-cyclohexyloxy]-benzoic acid(t-AUCB)對動脈粥樣斑塊面積的影響及機制;并觀察t-AUCB對脂肪細胞介

2、導膽固醇逆轉(zhuǎn)運(reversecholesterol transport，RCT)的影響;同時觀察不同濃度t-AUCB處理組小鼠血清介導的脂肪細胞膽固醇流出的影響。本研究有利于闡明t-AUCB抗AS的可能機制，并加深對t-AUCB抗AS的了解，為臨床治療提供新的思路。
　　 方法：
　　 36只雄性8周齡apoE-/-小鼠隨機分為正常飲食組，高膽固醇飲食組和t-AUCB組。高膽固醇飲食組小鼠予以標準高膽固醇飲食8w，t-

3、AUCB組小鼠在高膽固醇飲食8w的基礎上分別加用不同濃度的t-AUCB(0，5，15，50mg/L)再喂養(yǎng)1w。對小鼠整個主動脈進行蘇丹Ⅲ和HE染色，觀察各組小鼠主動脈斑塊形成及變化情況。分別給各組小鼠腹腔注射經(jīng)3H-膽固醇處理過的脂肪細胞懸液(細胞數(shù)達2.5×106個/M1)單獨籠養(yǎng)48h后收集血清、肝臟、膽汁和糞便。液體閃爍計數(shù)儀分別檢測血清、肝臟、膽汁和糞便中3H-膽固醇的放射活性，并計算其占腹腔注射總量的百分比。前脂肪細胞3T3

4、-L1與1μCi/mL3H-膽固醇共同孵育24h后標記脂肪細胞，以不同濃度t-AUCB處理組小鼠血清作為脂肪細胞膽固醇流出的接受體，液體閃爍計數(shù)儀檢測脂肪細胞內(nèi)和細胞上清液中3H-膽固醇的放射活性并計算膽固醇流出率。實時熒光定量多聚酶鏈式反應(Realtime-PCR)測定肝臟三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運子A1(ATP-binding cassette transporter A1，ABCAl)、清道夫受體BI（Scavenger recept

5、or class B Type1，SR-BI）、三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運子G5(ATP-binding cassette transporter G5，ABCG5)和三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運子G8(ATP-binding cassette transporter G8，ABCG8)mRNA的表達;免疫印跡法(Western Blot)測定脂肪細胞ABCA1、SR-BI、ABCG5和ABCG8蛋白的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1.

6、正常飲食組和高膽固醇飲食組小鼠主動脈動脈粥樣斑塊面積占總血管面積的百分比分別為(25.48±1.86)％，(76.32±5.08)％。與正常飲食組相比，高膽固醇飲食組小鼠主動脈粥樣斑塊面積明顯增大，有顯著性差異(P＜0.05); t-AUCB0、5、15、50mg/L組小鼠主動脈動脈粥樣斑塊面積占總血管面積的百分比分別為(76.32±5.08)％、(66.7±3.37)％、(48.56±0.77)％、(36.74±1.64)％。 t-A

7、UCB0mg/L組相比，t-AUCB5、15、50mg/L可呈濃度依賴性縮小小鼠主動脈粥樣斑塊面積，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 2.與正常飲食組相比，高膽固醇飲食組小鼠血清、肝臟、膽汁和糞便3H-膽固醇放射活性降低的百分比分別為45％，4.7％，60.8％，57.4％;與t-AUCB0mg/L相比，t-AUCB5、15、50mg/L呈濃度依賴性升高血清3H-膽固醇放射活性的百分比分別為81％、135％和197％;升高肝

8、臟3H-膽固醇放射活性的百分比分別為38.46％、138％和141％;升高膽汁3H-膽固醇放射活性的百分比分別為155％、178％和233％;升高糞便3H-膽固醇放射活性的百分比分別為65％、161％和226％;
　　 3.正常飲食組和高膽固醇飲食組小鼠血清介導的膽固醇流出率分別為（8.20±0.88）％，（6.39±1.11）％。與正常飲食組相比，高膽固醇飲食組小鼠血清介導的膽固醇流出率降低，達到統(tǒng)計學差異(P＜0.05);與

9、t-AUCB0mg/L組相比，t-AUCB5、15、50mg/L組小鼠血清介導的脂肪細胞膽固醇流出率呈濃度依賴性增加，分別為（6.39±1.11）％，(8.18±0.34)％，(9.22±1.22)％，(10.81±0.71)％，均達到統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 4.與正常飲食組相比，高膽固醇飲食組肝臟和小腸組織ABCG5和ABCG8 mRNA和蛋白的表達增強，達到統(tǒng)計學差異(P＜0.05);與t-AUCB0mg/L組相

10、比，t-AUCB5、15、50mg/L組呈濃度依賴性降低肝臟組織ABCA(l) mRNA和蛋白的表達，并呈濃度依賴性升高肝臟和小腸組織ABCG5和ABCG8mRNA和蛋白的表達，均達統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，t-AUCB對肝臟SR-BI mRNA和蛋白的表達無影響(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.高膽固醇飲食可增加小鼠主動脈粥樣斑塊面積，而t-AUCB可劑量依賴性降低高膽固醇飲食小鼠主動脈粥樣斑塊面積。

11、>　　 2.高膽固醇飲食降低小鼠體內(nèi)脂肪細胞介導膽固醇逆轉(zhuǎn)運的效率，而t-AUCB升高高膽固醇飲食小鼠體內(nèi)脂肪細胞介導的膽固醇逆轉(zhuǎn)運的效率。
　　 3.高膽固醇飲食組小鼠血清介導的脂肪細胞膽固醇流出率降低;而t-AUCB可呈濃度依賴性升高高膽固醇飲食組小鼠血清介導的脂肪細胞膽固醇流出率。
　　 4.t-AUCB升高高膽固醇飲食小鼠體內(nèi)脂肪細胞介導的膽固醇逆轉(zhuǎn)運的效率可能與升高小鼠血清介導的脂肪細胞膽固醇流出，降低小鼠肝