竹節(jié)參多糖提取分離和免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：
　　 建立竹節(jié)參多糖(Panax japonicus polysaccharide，PJPS)含量的測定方法，獲得合理、穩(wěn)定、效率高的PJPS提取工藝，探討其在免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤方面的活性。
　　 方法：
　　 1、以無水葡萄糖為標準品，采用分光光度法，對蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法的測定條件和方法學(xué)進行考察，并比較兩種方法測定竹節(jié)參多糖含量的結(jié)果。
　　 2、以PJPS提取率為考察指標，以單因素實驗為基

2、礎(chǔ)，采用正交試驗確定最佳提取工藝，通過木瓜蛋白酶法、分步醇沉對PJPS進行精制。
　　 3、通過小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗、遲發(fā)型超敏反應(yīng)(Delayed-type hypersensitivity，DTH)實驗、血清溶血值測定實驗從非特異性免疫應(yīng)答、細胞性免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答三個方面研究PJPS對環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)能力。
　　 4、采用MTT法檢測不同濃度PJPS分別在24 h、48 h及72 h對

3、人肺癌細胞HTB182、人腸癌細胞SW480、人腎癌細胞HEK293、人鼻咽癌細胞5-8F及人肝癌細胞HepG2增殖的作用。
　　 結(jié)果：
　　 1、蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法均可用于測定竹節(jié)參中多糖含量，但蒽酮硫酸法的測定結(jié)果高于苯酚硫酸法，其標準曲線的線性，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性均優(yōu)于苯酚硫酸法。
　　 2、PJPS的最佳提取工藝為:40倍溶劑用量，浸泡40 min，100℃，提取兩次，每次4h。木瓜蛋白酶法能較好地去除

4、PJPS中的蛋白質(zhì)，分步醇沉實驗將PJPS分為PJPSⅠ和PJPSⅡ兩部分。
　　 3、PJPS能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠巨噬細胞的吞噬率和吞噬指數(shù)，且與陽性對照香菇多糖組的作用相當，對免疫低下小鼠的廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)α具有明顯的提高作用，也能明顯改善免疫低下小鼠的脾臟和胸腺指數(shù)及血清中IgM水平，且對免疫低下小鼠血清中IgM水平改善程度明顯優(yōu)于陽性對照香菇多糖。
　　 4、與陰性對照組相比，不同濃度PJPSS

5、在24 h、48 h、72 h對人肺癌細胞HTB182、人腸癌細胞SW480、人腎癌細胞HEK293、人鼻咽癌細胞5-8F及人肝癌細胞HepG2增殖無顯著性影響。
　　 結(jié)論
　　 1、蒽酮硫酸法更適于測定竹節(jié)參中多糖的含量，此方法簡單快速，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果可靠。
　　 2、PJPS的最佳提取工藝為:40倍溶劑用量，浸泡40 min，100℃，提取兩次，每次4h。
　　 3、PJPS能從非特異性免疫應(yīng)答