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文檔簡介
1、目的:
建立竹節(jié)參多糖(Panax japonicus polysaccharide,PJPS)含量的測定方法,獲得合理、穩(wěn)定、效率高的PJPS提取工藝,探討其在免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤方面的活性。
方法:
1、以無水葡萄糖為標準品,采用分光光度法,對蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法的測定條件和方法學(xué)進行考察,并比較兩種方法測定竹節(jié)參多糖含量的結(jié)果。
2、以PJPS提取率為考察指標,以單因素實驗為基
2、礎(chǔ),采用正交試驗確定最佳提取工藝,通過木瓜蛋白酶法、分步醇沉對PJPS進行精制。
3、通過小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗、遲發(fā)型超敏反應(yīng)(Delayed-type hypersensitivity,DTH)實驗、血清溶血值測定實驗從非特異性免疫應(yīng)答、細胞性免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答三個方面研究PJPS對環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)能力。
4、采用MTT法檢測不同濃度PJPS分別在24 h、48 h及72 h對
3、人肺癌細胞HTB182、人腸癌細胞SW480、人腎癌細胞HEK293、人鼻咽癌細胞5-8F及人肝癌細胞HepG2增殖的作用。
結(jié)果:
1、蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法均可用于測定竹節(jié)參中多糖含量,但蒽酮硫酸法的測定結(jié)果高于苯酚硫酸法,其標準曲線的線性,穩(wěn)定性和重現(xiàn)性均優(yōu)于苯酚硫酸法。
2、PJPS的最佳提取工藝為:40倍溶劑用量,浸泡40 min,100℃,提取兩次,每次4h。木瓜蛋白酶法能較好地去除
4、PJPS中的蛋白質(zhì),分步醇沉實驗將PJPS分為PJPSⅠ和PJPSⅡ兩部分。
3、PJPS能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠巨噬細胞的吞噬率和吞噬指數(shù),且與陽性對照香菇多糖組的作用相當,對免疫低下小鼠的廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)α具有明顯的提高作用,也能明顯改善免疫低下小鼠的脾臟和胸腺指數(shù)及血清中IgM水平,且對免疫低下小鼠血清中IgM水平改善程度明顯優(yōu)于陽性對照香菇多糖。
4、與陰性對照組相比,不同濃度PJPSS
5、在24 h、48 h、72 h對人肺癌細胞HTB182、人腸癌細胞SW480、人腎癌細胞HEK293、人鼻咽癌細胞5-8F及人肝癌細胞HepG2增殖無顯著性影響。
結(jié)論
1、蒽酮硫酸法更適于測定竹節(jié)參中多糖的含量,此方法簡單快速,重現(xiàn)性好,測定結(jié)果可靠。
2、PJPS的最佳提取工藝為:40倍溶劑用量,浸泡40 min,100℃,提取兩次,每次4h。
3、PJPS能從非特異性免疫應(yīng)答
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