結(jié)核分枝桿菌-巨噬細(xì)胞相互作用的研究.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的最為重要的傳染性病原體之一，每年可以引起2～3百萬人感染結(jié)核病。結(jié)核分枝桿菌是典型的胞內(nèi)致病菌，它可以在宿主巨噬細(xì)胞內(nèi)存活。巨噬細(xì)胞和結(jié)核分枝桿菌的初始相互作用中免疫調(diào)節(jié)因子(包括細(xì)胞因子、趨化因子及其它們的受體)，在細(xì)菌能否引起機體發(fā)病中可能起著關(guān)鍵作用。目前，對于結(jié)核桿菌感染中趨化因子和趨化因子受體的了解十分有限。 為了弄清楚趨化因子和趨化因子受體

2、在結(jié)核桿菌感染的巨噬細(xì)胞中的變化，我們利用活化的人巨噬細(xì)胞系U937作為結(jié)核桿菌感染的體外模型，應(yīng)用基因芯片檢測技術(shù)、半定量PCR、流式細(xì)胞術(shù)等手段來研究巨噬細(xì)胞在不同感染階段(0小時，6小時，12小時和24小時)的趨化因子和趨化因子受體的表達(dá)譜?；蛐酒慕Y(jié)果顯示，結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細(xì)胞6小時和12小時都可以檢測到有變化的基因，感染24小時，明顯上調(diào)的基因有25條，其中顯著上調(diào)的基因有22條。半定量RT一PCR證實了部分基

3、因(IL一8，MIP卜Q，RANTES，CXCR4和CCR5)的芯片檢測結(jié)果。 我們在用基因芯片法檢測了結(jié)核桿菌感染巨噬細(xì)胞后的全部趨化因子和趨化因子受體的表達(dá)變化中，發(fā)現(xiàn)兩個重要的趨化因子受體CCR5和CXCR4是表達(dá)上調(diào)的，CCR5和CXCR4是人類艾滋病病毒HIV入侵人體細(xì)胞的兩個重要輔助受體，結(jié)合我們在臨床上觀察到的有一部分的艾滋病患者同時患有結(jié)核病，我們推測趨化因子受體CCR5和CxCR4在結(jié)核分枝桿菌感染后的表達(dá)上調(diào)

4、可能是結(jié)核?。滩」不嫉牧硪粋€原因。 為了了解CCR5和CXCR4的上調(diào)表達(dá)是結(jié)核桿菌感染特異產(chǎn)生的還是炎癥類致病菌都能產(chǎn)生的普遍現(xiàn)象，我們又用另一種致病菌伴放線放線桿菌((Actinobacillusactinomycetemcomitans)去攻擊巨噬細(xì)胞，然后從mRNA和蛋白水平觀測CCR5和CXCR4的表達(dá)變化，結(jié)果表明伴放線放線桿菌也能刺激這兩個分子的上調(diào)表達(dá)。為了進(jìn)一步揭示CCR5和CXCR4表達(dá)變化的分子機理，研

5、究了結(jié)核分枝桿菌感染后巨噬細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化，詳細(xì)考察了CCR5和CXCR4的啟動子結(jié)構(gòu)，然后我們定位在MAPK通路和共同的調(diào)節(jié)因子YYl上。運用p38MAPK的特異性抑制劑SB203580，我們研究其對CCR5，CXCR4和CCR5、CXCR4的共同的負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子YYl的表達(dá)影響。最終的實驗結(jié)果表明在我們的模型中CCR5和CXCR4的上調(diào)主要是p38MAPK介導(dǎo)的，YYl依賴，這個結(jié)果表明CCR5和CXCR4的上調(diào)和MTB／HI