COX-2在胃癌發(fā)生中的相關(guān)作用及機(jī)制.pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文COX2在胃癌發(fā)生中的相關(guān)作用及機(jī)制姓名：吳漢平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師：吳開(kāi)春樊代明2001.4.1蘭竺竺苧查竺!查竺竺竺查?！籆OX2在胃癌發(fā)生中的相關(guān)作用及機(jī)制碩士研究生吳漢平導(dǎo)師吳開(kāi)春教授樊代明教授摘要本研究旨在克隆COX一2編碼基因的全長(zhǎng)cDNA序列，并構(gòu)建其正、反義真核表達(dá)栽休通過(guò)基因轉(zhuǎn)染

2、，逆轉(zhuǎn)原先COX一2高表達(dá)或低表達(dá)的人胃癌細(xì)胞系的表遮水平，觀(guān)察其生物學(xué)行為及相應(yīng)信號(hào)分子、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的變化情況，以初步探討COX一2表達(dá)在胃癌發(fā)生申的采些具體機(jī)制f主要實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果包括：1由COX一2高表達(dá)的胃癌細(xì)胞中提取RNA，通過(guò)RT—PCR方法，擴(kuò)增了編碼COX一2全長(zhǎng)的cDNA序列經(jīng)序列測(cè)定加以證實(shí)2通過(guò)定向克隆方法，將目的基因按正反兩個(gè)方向亞克隆至真核表達(dá)栽體pcDNA31()，構(gòu)建其正、反義真棱表達(dá)載體pcDNA3I／

3、hCOX2()及pcDNA3I／hCOX2(1，其方向性由酶切鑒定證實(shí)3使用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法用反義重組栽體及空載體分別轉(zhuǎn)染COX一2異常高表達(dá)的人胃癌細(xì)胞系SGC7901，經(jīng)G418篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株7901一AS及7901P經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)及KNA斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)證實(shí)：在反義核酸轉(zhuǎn)染的7901一AS細(xì)胞申COX一2的蛋白及mRNA水平均下調(diào)4MTT比色試驗(yàn)顯示7901一AS細(xì)胞的增殖速度低于親本SGC7901細(xì)胞5裸鼠體內(nèi)成瘤試驗(yàn)表