氫醌細(xì)胞毒性、DNA損傷及沙苑子黃酮和Vc修復(fù)作用的研究.pdf

1、目的：氫醌(Hydroquinone，HQ)，又名對苯二酚(C6H6O2)，為晶狀固體，廣泛用于化工和醫(yī)療行業(yè)，氫醌還是苯的主要活性代謝產(chǎn)物之一。氫醌在許多實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中均可引起遺傳損傷。在長期試驗(yàn)中氫醌還是一種致癌劑。它還可增加其它化合物的致癌效應(yīng)，如甲基-N-戊基亞硝胺和N-甲基-N-硝基-N-硝基胍。近年來對其遺傳毒性機(jī)制的研究取得一些進(jìn)展，但確切機(jī)制還未闡明。本研究旨在了解HQ的細(xì)胞毒性、凋亡和DNA損傷及修復(fù)，試圖探討HQ可能的遺

2、傳損傷機(jī)制和防護(hù)劑，為提出有效保護(hù)苯和HQ職業(yè)暴露人群健康的措施提供依據(jù)。 方法：本研究通過MTT比色法檢測不同濃度的HQ對V79細(xì)胞作用后細(xì)胞存活率的變化，了解濃度-毒性效應(yīng)之間的關(guān)系；用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測不同濃度HQ對V79細(xì)胞(中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞)的DNA損傷程度及類型，并觀察不同時間段細(xì)胞的自身修復(fù)情況；采用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)雙標(biāo)記法觀察V79細(xì)胞HQ在作用下的凋亡率及其凋亡形態(tài)的改變；用DCFH-DA

3、法檢測不同濃度HQ處理V79細(xì)胞0.5h和1h后活性氧(ROS)的含量；分別用不同濃度沙苑子黃酮、維生素C與HQ共同作用于V79細(xì)胞后，用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)檢測DNA損傷的變化情況，觀察沙苑子黃酮和維生素C對HQ所致DNA損傷的修復(fù)作用。 結(jié)果：HQ從0.15mmol/L(作用2小時)開始即對V79細(xì)胞生長產(chǎn)生明顯抑制作用，并隨濃度增加呈劑量反應(yīng)關(guān)系。單細(xì)胞凝膠電泳結(jié)果顯示，在設(shè)置的5個濃度范圍內(nèi)(0.015mmol

4、/L-1.215mmol/L)，彗星細(xì)胞拖尾率隨著濃度的增加而增加，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；在0.405 mmol/L濃度組，尾長、Olive尾矩、彗星矩和尾／頭長4個彗星損傷形態(tài)學(xué)指標(biāo)隨著修復(fù)時間的延長而逐漸降低，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。AO/EB雙標(biāo)記法顯示，氫醌(0.015mmol/L-1.215mmol/L，作用24小時)對V79細(xì)胞有明顯促凋亡作用，并呈濃度反應(yīng)關(guān)系。DCFH-DA法檢測結(jié)果顯示，在設(shè)置的4

5、個濃度范圍內(nèi)(0.015mmol/L-0.405mmol/L)，活性氧含量隨著濃度的增加而增加(P<0.01)；染毒0.5h組各濃度ROS含量均高于染毒1h組各相應(yīng)濃度(P<0.01)，且呈濃度依賴關(guān)系。單細(xì)胞凝膠電泳結(jié)果顯示，200、20μmol/L維生素C和100mg/L沙苑子黃酮對0.405和0.135mmol/L濃度的HQ均有保護(hù)作用，表現(xiàn)為彗星細(xì)胞拖尾率、尾長、Olive尾矩降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

6、而2000 μmol/L維生素C則加重了HQ的DNA損傷。 結(jié)論：本研究結(jié)果認(rèn)為，在體外培養(yǎng)條件下，低濃度(0.15mmol/L)HQ能明顯抑制V79細(xì)胞的增殖并呈濃度依賴關(guān)系，0.015mmol/LHQ就能引起DNA損傷，主要是單鏈斷裂，這種損傷部分可自身修復(fù)。在體外培養(yǎng)條件下，低濃度(0.015mmol/L)HQ能致V79細(xì)胞凋亡，活性氧產(chǎn)生的高峰在0.5h，表明HQ可引起細(xì)胞DNA的氧化損傷并誘導(dǎo)凋亡。中低濃度維生素C(2