甜葉菊EMS誘變及耐鹽突變體的篩選與鑒定.pdf

1、甜葉菊（Stevia rebaudiana Bertoni）作為一種理想的甜味劑和功能性保健產品，已為食品和醫(yī)藥領域研究和開發(fā)的熱點。甜葉菊是一種鹽敏感植物，在土地鹽堿化日益嚴重的今天，選育耐鹽性強、適應性廣的甜葉菊新品種顯得十分迫切和尤為重要。采用化學誘變與組織培養(yǎng)相結合的離體化學誘變是獲得甜葉菊耐鹽突變體的一種行之有效的方法。本試驗以‘皖甜1號’-B1甜葉菊無菌組培苗莖段為試驗材料，以甲基磺酸乙酯(EMS)為誘變劑，以NaCl作為選

2、擇壓力，對甜葉菊組培苗耐鹽閾值（臨界NaCl濃度）以及EMS誘變甜葉菊組培苗的適宜濃度和時間進行了研究，以篩選出的1.0％NaCl為選擇壓力，篩選出了甜葉菊耐鹽變異株，通過生理生化和SRAP標記對耐鹽變異體進行了耐鹽性鑒定，并對鹽突變體進行了盆栽耐鹽性驗證。主要研究結果如下:
　　1、隨著NaCl濃度（0、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1.0％和1.2％）的升高，甜葉菊組培苗長勢逐漸變弱、生長受抑制、植株矮小、存活率和生

3、根率顯著降低;當NaCl濃度達到1.0％時，甜葉菊組培苗基本停止生長，葉片變小、發(fā)黃，存活率為3.13％，生根率為0;當NaCl濃度為1.2％時組培苗全部死亡。根據篩選真正的耐鹽變異體的原則，初步確定‘皖甜1號’-B1甜葉菊組培苗耐鹽臨界NaCl濃度為1.0％。
　　2、將甜葉菊組培苗置于濃度分別為0、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1.0％和1.2％的EMS中，分別震蕩浸泡0h、2h、4h、6h、8h、10h和12h后，

4、接種于MS培養(yǎng)基中，發(fā)現低濃度EMS及短時間處理，對甜葉菊組培苗株高、生根率和存活率影響較小;隨著EMS濃度的增大和處理時間的延長，甜葉菊組培苗長勢逐漸變弱，株高逐漸變小，項芽和腋芽生長速度較慢，生根率和存活率急劇下降;當EMS濃度大于1.0％，處理時間長于8h或濃度大于0.8％，處理時間長于10 h，甜葉菊組培苗的存活率均在50％以下，故確定EMS誘變‘皖甜1號’-B1甜葉菊組培苗帶腋芽莖段的適宜濃度和時間范圍為0.8-1.0％EMS

5、處理8-10h。
　　3、甜葉菊組培苗莖段經1.0％ EMS處理8h后，接種于含1.0％ NaCl的MS培養(yǎng)基中，進行誘變株的耐鹽性篩選，45 d后的存活率為13.67％，顯著高于對照的3.33％，共獲得41株耐鹽變異株。
　　4、耐鹽變異株接種存活后的第5d、10d、15d、20 d和25 d分別取樣，測定了處理和對照的葉綠素、脯氨酸、MDA、可溶性糖和可溶性蛋白含量，相對電導率以及POD、SOD和CAT等細胞膜保護酶系的

6、活性。結果表明，變異株的葉綠素、脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量均顯著高于對照，相對電導率和MDA含量顯著低于對照，CAT、POD和SOD活性在鹽脅迫的大多時間內顯著高于對照。這表明，甜葉菊組培苗經EMS誘變產生的突變體經篩選后可獲得耐鹽性強的變異植株。
　　5、將經過1.0％NaCl反復篩選出的41株甜葉菊組培苗擴繁后提取其葉片DNA，并進行SRAP分子標記鑒定。結果表明，在生理生化水平上表現出耐鹽性的41株甜葉菊組培苗耐鹽變異