海洋真菌抗癌新結(jié)構(gòu)化合物1386-A作為肺癌AKT分子靶向藥的體外研究.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)觀察海洋真菌抗癌新結(jié)構(gòu)化合物1386-A對肺癌A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響并探討其作用機制。 方法：MTT法測定不同濃度1386-A干預(yù)不同時間后對A549細(xì)胞增殖的影響，并計算其不同作用時點的IC50；電子顯微鏡觀察1386-A干預(yù)前后A549形態(tài)學(xué)的改變；流式細(xì)胞儀檢測分析1386-A干預(yù)前后A549細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的變化情況；基因芯片技術(shù)和real time RT—PCR檢測1386-A干預(yù)后變化具統(tǒng)計

2、學(xué)意義的microRNAs: Western blot檢測1386-A干預(yù)后A549細(xì)胞中P13K/AKT信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平變化情況。 結(jié)果：1386-A濃度大于10μM時對A549細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，其24小時、48小時和72小時的IC50分別為20.20、14.36和9.42μM，且該抑制作用呈濃度依賴性和時間依賴性；A549細(xì)胞在1386-A干預(yù)后，電鏡可觀察到典型的凋亡形態(tài)，流式細(xì)胞儀檢測到1386-A干預(yù)后

3、A549細(xì)胞GO/G1期比例升高、S期和G2/M期比例下降以及凋亡率增加，且其變化趨勢呈濃度依賴性和時間依賴性；在1386-A干預(yù)后，基因芯片和real time RT—PCR檢測到A549細(xì)胞有兩種microRNAs，即microRNA—638和microRNA—923表達(dá)上調(diào)，其平均信號強度較干預(yù)前均增高2倍以上；Western blot檢測到隨干預(yù)時間延長，p110α、p—Akt蛋白活性逐漸下降，p27蛋白活性有所增強。