水蛭素對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞VEGF及ROCK表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究水蛭素和凝血酶對(duì)hRPE細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，以及水蛭素對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的ROCK及VEGF表達(dá)的影響。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為4組，分別是空白組，水蛭素干預(yù)組，凝血酶干預(yù)組，凝血酶聯(lián)合水蛭素干預(yù)組，利用MTT研究各組 hRPE生長(zhǎng)的影響，利用Q-PCR和western-blot研究ROCK及VEGF基因和蛋白在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴加凝血酶孵育細(xì)胞，80U/ml、60U/ml、50U/ml、40

2、U/ml、20U/ml、15U/ml、10U/ml、5U/ml、2.5U/ml各濃度組間比較，40U/ml濃度培養(yǎng)的細(xì)胞吸光度顯著高于80U/ml、60U/ml、50U/ml、20U/ml濃度組及對(duì)照組；80U/ml、60U/ml、2.5U/ml濃度組細(xì)胞增殖率小于1，抑制率大于0，50U/ml、40U/ml、20U/ml、15U/ml、10U/ml、5U/ml濃度組細(xì)胞增殖率大于1，抑制率小于0。加水蛭素孵育細(xì)胞，40U/ml、20U

3、/ml、10U/ml、5U/ml、1U/ml各濃度組間比較，5U/ml濃度培養(yǎng)的細(xì)胞吸光度顯著高于40U/ml濃度組及對(duì)照組，高于其它濃度組，20U/ml、10U/ml、5U/ml、1U/ml濃度組細(xì)胞增殖率大于1，抑制率小于0，40U/ml濃度組細(xì)胞增殖率小于1，抑制率大于0；加水蛭提取液孵育細(xì)胞，1mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、25mg/ml、50mg/ml、64mg/ml各濃度組細(xì)胞吸光

4、度都顯著低于對(duì)照組，各濃度組細(xì)胞的增殖率都小于1，抑制率都大于0。⑵VEGF基因檢測(cè)結(jié)果：4個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組組間對(duì)比。與空白組對(duì)比，凝血酶干預(yù)組hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在12h、24h、48h顯著上調(diào)，在72h上調(diào)；水蛭素干預(yù)組hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在12h、24h下調(diào)，在48h、72h顯著下調(diào)；凝血酶+水蛭素干預(yù)組hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在12h、24h顯著上調(diào)，在48h、72h顯著下調(diào)；與水蛭素干預(yù)組對(duì)比，凝血酶干預(yù)

5、組 hRPE細(xì)胞 VEGF的基因表達(dá)在12h、24h、48h、72h顯著上調(diào)；凝血酶+水蛭素干預(yù)組hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在12h、24h顯著上調(diào)，在48h上調(diào)，在72h顯著下調(diào)；與凝血酶干預(yù)組對(duì)比，凝血酶+水蛭素干預(yù)組hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在12h、24h顯著上調(diào)，在48h、72h顯著下調(diào)；每組4個(gè)時(shí)間點(diǎn)前后對(duì)比，空白組，與12h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在24h、48h、72h有顯著上調(diào)；與24h對(duì)比，hRP

6、E細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在48h、72h有顯著上調(diào)；與48h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在72h有下調(diào)；水蛭素干預(yù)組，與12h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在24h、48h、72h有顯著上調(diào)；與24h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在48h、72h有顯著上調(diào)；與48h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在72h有上調(diào)；凝血酶干預(yù)組，與12h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在24h有上調(diào)，48h、72h有顯著上調(diào)；與

7、24h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在48h、72h有顯著上調(diào)；與48h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在72h有顯著下調(diào)；凝血酶+水蛭素干預(yù)組，與12h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在24h、48h有顯著上調(diào)，72h有上調(diào)；與24h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在48h、72h有顯著下調(diào)；與48h對(duì)比，hRPE細(xì)胞VEGF的基因表達(dá)在72h有下調(diào)。VEGF蛋白檢測(cè)結(jié)果：與空白組對(duì)比，凝血酶干預(yù)組，hRPE細(xì)胞VE

8、GF的蛋白表達(dá)在12h、24h、48h、72h均上調(diào)；水蛭素干預(yù)組，hRPE細(xì)胞VEGF的蛋白表達(dá)在12h、24h、48h均下調(diào)，72h上調(diào)；凝血酶+水蛭素干預(yù)組，hRPE細(xì)胞VEGF的蛋白表達(dá)在12h、24h、48h、72h均上調(diào)。⑶ROCK基因檢測(cè)結(jié)果。4個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組組間對(duì)比：與空白組對(duì)比，凝血酶干預(yù)組，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在12h、24h顯著上調(diào)，在48h、72h下調(diào)；水蛭素干預(yù)組，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在12h

9、、48h、72h顯著下調(diào)，在24h顯著上調(diào)；凝血酶+水蛭素干預(yù)組，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在12h、24h、72h顯著上調(diào)，在48h顯著下調(diào)；與水蛭素干預(yù)組對(duì)比，凝血酶干預(yù)組hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在12h、24h、48h、72h顯著上調(diào)；凝血酶+水蛭素干預(yù)組 hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在12h、24h、72h顯著上調(diào)，在48h上調(diào)；與凝血酶干預(yù)組對(duì)比，凝血酶+水蛭素干預(yù)組hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在12h上調(diào)，在4

10、8h顯著下調(diào)，在72h顯著上調(diào)。⑷每組4個(gè)時(shí)間點(diǎn)前后對(duì)比?？瞻捉M，與12h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在24h上調(diào)，48h、72h顯著上調(diào)；與24h對(duì)比，hRPE細(xì)胞 ROCK的基因表達(dá)在48h、72h顯著上調(diào)；與48h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在72h顯著下調(diào)；水蛭素干預(yù)組，與12h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在24h、72h顯著上調(diào)，48h下調(diào)；與24h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在48h、72h顯

11、著下調(diào)；與48h對(duì)比，72h顯著上調(diào)；凝血酶干預(yù)組，與12h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在24h、48h、72h顯著上調(diào)；與24h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在48h上調(diào)，在72h顯著下調(diào)；與48h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在72h顯著下調(diào)；凝血酶+水蛭素干預(yù)組，與12h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在24h、72h顯著上調(diào)，在48h顯著下調(diào)；與24h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在48h顯著下調(diào)，

12、在72h上調(diào)；與48h對(duì)比，hRPE細(xì)胞ROCK的基因表達(dá)在在72h顯著上調(diào)。ROCK蛋白檢測(cè)結(jié)果：與空白組對(duì)比，凝血酶12h、24h、48h、72h能增加ROCK蛋白的表達(dá)；而水蛭素干預(yù)的hRPE細(xì)胞ROCK蛋白的表達(dá)在12h和24h上調(diào)，在48h下調(diào)，到72h表達(dá)上調(diào)；凝血酶聯(lián)合水蛭素干預(yù)的hRPE的ROCK蛋白表達(dá)在12h到24h上調(diào)，48h、72h下調(diào)。
　　結(jié)論：各濃度凝血酶對(duì)hRPE都具有促進(jìn)增殖的作用，40U/ml作

13、用顯著，20U/ml、10U/ml、5U/ml、1U/ml的水蛭素對(duì)hRPE具有促進(jìn)增殖的作用，5U/ml作用顯著，40U/ml水蛭素對(duì)hRPE具有抑制增殖的作用。水蛭提取液對(duì)細(xì)胞增殖具有顯著抑制作用。水蛭素能夠抑制hRPE細(xì)胞VEGF的表達(dá)，凝血酶能夠促進(jìn) hRPE細(xì)胞 VEGF的表達(dá)，同時(shí)，水蛭素能夠抑制凝血酶誘導(dǎo)的 hRPE細(xì)胞VEGF的表達(dá)。水蛭素能夠抑制hRPE細(xì)胞ROCK的表達(dá)，凝血酶能夠促進(jìn)hRPE細(xì)胞ROCK的表達(dá)，水蛭