SDF-1α復(fù)合Pluronic F-127對BMSCs體外誘導(dǎo)成骨的實驗觀察.pdf

1、目的：以Pluronic F-127為支架材料,構(gòu)建裝載基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1α,SDF-1α)的Pluronic F-127新型復(fù)合材料,探討其對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的體外趨化作用,并將Pluronic F-127與BMSCs復(fù)合培養(yǎng),觀察兩者間生物相容性,進而研究復(fù)合SDF-1α水凝膠對BMSCs誘導(dǎo)分化成成

2、骨細(xì)胞的影響。
　　研究方法：構(gòu)建裝載不同濃度SDF-1α(200、50 ng/ml)的Pluronic F-127復(fù)合水凝膠,采用Transwell小室法進行復(fù)合水凝膠對BMSCs的體外趨化實驗,通過對遷移BMSCs的計數(shù)與統(tǒng)計分析,篩選出趨化作用較好的復(fù)合水凝膠。將BMSCs與篩選出的復(fù)合水凝膠均勻混合培養(yǎng),用MTT法檢測復(fù)合培養(yǎng)后細(xì)胞的活性狀況。將BMSCs與篩選出的復(fù)合水凝膠混合均勻,待凝膠形成后加成骨誘導(dǎo)液進行培養(yǎng),同時

3、分別設(shè)置單純BMSCs的成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)和完全培養(yǎng)基培養(yǎng),對以上各行堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性測定及茜素紅染色,觀察并記錄各檢測結(jié)果,分析各BMSCs的成骨誘導(dǎo)分化情況。
　　結(jié)果：趨化結(jié)果顯示,含SDF-1α濃度為200 ng/ml的復(fù)合水凝膠對BMSCs的募集效果顯著,與含SDF-1α濃度為50 ng/ml的復(fù)合水凝膠相比,其趨化下室濾膜表面的細(xì)胞轉(zhuǎn)移數(shù)目明顯增多(P<0.05)。MTT法

4、證實Pluronic F-127對細(xì)胞增殖不產(chǎn)生影響,BMSCs-水凝膠復(fù)合培養(yǎng)與單純BMSCs培養(yǎng)相比,兩者間細(xì)胞活性差異并無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。AKP活性測定表明,BMSCs-復(fù)合水凝膠、單純BMSCs在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下,兩者中細(xì)胞的AKP表達量均明顯增高,并且都高于非成骨誘導(dǎo)組(P<0.05),同時經(jīng)成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)的細(xì)胞,在鏡下均可見明顯的橘紅色鈣結(jié)節(jié)團塊,而非加成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)的細(xì)胞,鏡下則未見鈣結(jié)節(jié)形成。
　　結(jié)