鴨瘟病毒AV1221株UL24基因的克隆與原核表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、將鴨瘟強(qiáng)毒AV1221株一百倍稀釋?zhuān)臃N12日齡鴨胚絨毛尿囊腔，增殖病毒。根據(jù)GenBank中已發(fā)表鴨瘟弱毒株序列，設(shè)計(jì)合成四條引物，以病毒DNA為模板，用PCR方法，分段擴(kuò)增UL24-TK(414bp)、UL24-25(1813bp)基因片段，并用巢式PCR進(jìn)行目的DNA的篩選。將擴(kuò)增得到的基因克隆到pMD18-T載體上，經(jīng)藍(lán)白斑和PCR鑒定篩選出陽(yáng)性克隆進(jìn)行序列測(cè)定，用生物學(xué)軟件將所測(cè)序列進(jìn)行編輯，然后將其與弱毒序列和其它α-皰疹病

2、毒進(jìn)行比較。結(jié)果顯示：鴨瘟病毒AV1221株UL24基因ORF全長(zhǎng)為1230bp，編碼409個(gè)氨基酸，與參考序列比較，核苷酸同源性為99.8％，有三個(gè)核苷酸位點(diǎn)發(fā)生變異，氨基酸的同源性為99.8％，僅有一個(gè)核苷酸位點(diǎn)發(fā)生變異，與禽皰疹病毒的親緣性較近。上述結(jié)果表明，UL24基因在不同毒株間高度保守。 采用生物學(xué)軟件分析UL24蛋白的抗原性選取其中一段抗原性較好的區(qū)域，命名為UL24-1，重新設(shè)計(jì)一對(duì)引物，引物兩端有Ecoli Ⅰ

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