Wnt-5a、β-catenin和APC在結直腸癌中的表達與意義.pdf

1、目的: 本課題檢測Wnt-5a在結直腸癌（CRC）中基因和蛋白水平的表達，同時研究Wnt-5a、β-catenin和APC蛋白表達與其臨床病理因素間的關系，并分析Wnt-5a與β-catenin、APC表達的相關性，嘗試從新的角度對結直腸癌的發(fā)生發(fā)展進行初步探討，研究Wnt-5a對早期診斷和預后判斷結直腸癌的價值，為今后結直腸癌的基因治療提供理論依據(jù)。 方法: 收集手術切除的11例新鮮結直腸癌（注意避開壞死區(qū)域取

2、材）及相應的正常粘膜組織（距癌變邊界10cm外），采用實時定量RT-PCR技術檢測Wnt-5a mRNA的表達；同時選取65例結直腸癌及相應癌旁組織、20例腺瘤組織和20例正常結直腸組織的石蠟標本，采用免疫組化SP法檢測Wnt-5a、β-catenin和APC基因蛋白產物的表達。運用配對t檢驗、卡方檢驗及Spearman等級相關進行統(tǒng)計學分析。 結果: 實時定量RT-PCR結果 Wnt-5a mRNA在72.7

3、%（8/11例）結直腸癌組織的表達高于相應正常組織，其在結直腸癌及相應正常組織中表達的相對含量分別為：0.012317±0.013965和0.000497±0.000739，兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義（t=2.768，P=0.02）。 免疫組化染色結果 （1）Wnt-5a在結直腸正常組呈弱陽性或陰性胞質內表達，在腺瘤組呈彌漫顆粒狀的中等強度陽性表達，陽性表達率為80%（16/20例），在癌旁組呈弱陽性或陰性表達，陽性表達

4、率為40.0%（26/65例），三組間比較，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；Wnt-5a蛋白在高中分化CRC中呈中等強度或強陽性表達，陽性表達率為58.8%（20/34例），而在低分化CRC則呈明顯下調的弱陽性或缺失表達，陽性表達率為12.9%（4/31例），兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.01）。Wnt-5a的表達與腫瘤組織學分類有關（P<0.01），與其它臨床病理指標比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。 （2）β-cat

5、enin在結直腸正常組中100%呈現(xiàn)細胞膜的線性表達；在腺瘤組、癌旁組和癌組中出現(xiàn)胞質和/或胞核的異常表達，其陽性表達率分別為30.0%（6/20例）、16.9%（8/65例）、81.5%（50/65例），四組比較，具有統(tǒng)計學差異（P<0.01）；β-cateun在低分化CRC組的異常表達率（100%（31/31例））明顯高于高、中分化CRC組（64.7%（22/34例））；統(tǒng)計分析顯示，β-catenin的異常表達與腫瘤TNM分期、浸

6、潤深度和有無淋巴結轉移有關（P<0.05），與CRC組織學分類無關（P>0.05）。 （3）APC在結直腸正常組100%呈現(xiàn)胞質內棕黃色表達，而在腺瘤、癌旁和癌組則出現(xiàn)胞質的缺失表達，其缺失率分別為10.0%（2/20例）、10.8%（6/65例）、60.0%（39/65例），APC在癌組中的缺失表達與其它三組比較，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.01），在腺瘤和癌旁組的缺失表達均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。APC的表達與腫瘤組

7、織學分類有關（P<0.05），與腫瘤分化程度、TNM分期、浸潤深度以及淋巴結轉移情況無關（P>0.05）。 （4）在結直腸癌組織中，Wnt-5a與β-catenin的異常表達呈負相關關系（r=-0.350 P=0.005）；在結直腸腺瘤中Wnt-5a與β-catenin的異常表達無相關性（r=0.354，P=0.126）。 （5）在結直腸癌組織中，Wnt-5a與APC的缺失表達無相關性（r=-0.164P=0.203）；

8、在結直腸腺瘤中，Wnt-5a與APC的缺失表達呈正相關關系（r=0.541 P=0.014）。 （6）在結直腸癌組織中，APC與β-catenin的異常表達呈負相關關系（r=-0.275 P=0.031）；在結直腸腺瘤中，APC與β-catenin的異常表達有負相關趨勢，但無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 結論: （l）Wnt-5a mRNA在結直腸癌組織中出現(xiàn)較一致的上調表達，而Wnt-5a蛋白在高分化癌中明顯的

9、高表達，在低分化癌中低表達的現(xiàn)象，可以推測腫瘤對Wnt-5a的調節(jié)出現(xiàn)在翻譯水平，且Wnt-5a在CRC中可能發(fā)揮腫瘤抑制基因樣作用。其在高分化癌中高表達，低分化癌中的低表達是CRC發(fā)生及演進過程中的頻發(fā)事件，提示W(wǎng)nt-5a可能是一種結直腸癌預后好的標志物。 （2）β-catenin在結直腸腺瘤和CRC中顯示有意義的胞質和/或胞核異常表達，可能參與了結直腸腫瘤發(fā)生發(fā)展過程，且極有可能發(fā)生在早期。β-catenin蛋白胞質和/或

10、胞核的異常表達與CRC的分化程度、淋巴結轉移、浸潤深度、TNM分期等惡性行為有關。 （3）APC的缺失表達是結直腸腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的可見改變，其異常表達可能參與了結直腸腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程并與腫瘤的組織學分類有關。 （4）在CRC中，Wnt-5a與β-catenin的異常表達呈負相關關系，提示W(wǎng)nt-5a基因的異常可能是癌基因β-catenin異常表達的原因之一。 （5）在CRC中，Wnt-5a的表達與APC的表