肝再生增強因子對大鼠腎小管上皮細胞轉分化影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：利用已構建的大鼠肝再生增強因子(rALR)畢赤酵母(pichiapastoris)重組表達質粒pPIC9K-rALR，在酵母菌GS115中誘導表達rALR，并進行純化和體外生物學活性鑒定，為進一步研究rALR的生物學功能提供基礎；探討重組大鼠肝再生因子(rrALR)對轉化生長因子β1(TGF-β1)誘導的腎小管上皮細胞轉分化的影響。 方法：經PCR鑒定的重組質粒pPIC9K-rALR酶切線性化后轉入宿主菌GSl15中，在甲

2、醇誘導下進行表達。表達產物rALR經超濾方法純化后，用15％SDS-PAGE和Western blot印跡鑒定。采用3H-TdR摻入法，觀察rALR在體外對人肝癌細胞株QGY的促增殖作用以鑒定其活性；觀察細胞形態(tài)學變化，檢測α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、E一鈣粘蛋白(E-cadherin)和結締組織生長因子(CTGF)蛋白及mRNA的表達水平。 結果：目的蛋白rALR以外分泌方式在宿主菌GSl15中獲得高效表達，其分子量約為1

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