Prxs在矽塵致肺纖維化中的作用及槲皮素的干預(yù)研究.pdf

1、目的：矽肺（silicosis）是由于人們在從事生產(chǎn)的過程中長期的吸入含有大量的游離二氧化硅粉塵而引起的以肺組織彌漫性纖維化為主的全身性疾病。有研究表明，氧化抗氧化平衡失調(diào)是二氧化硅誘導(dǎo)的肺組織纖維化的機(jī)制之一。Peroxiredoxins（Prxs）蛋白是最近發(fā)現(xiàn)的一類過氧化物酶，屬于抗氧化蛋白超家族。Prxs蛋白可參與自由基的清除，能保護(hù)自由基敏感蛋白。Prxs蛋白在腫瘤發(fā)生中起著非常重要的作用，但是有關(guān)它在矽肺發(fā)病機(jī)制中的作用還未

2、見報(bào)道。槲皮素（quercetin, QU;3,4,5',3',4'2五羥基黃酮）及其衍生物具有多種生物學(xué)活性如清除氧自由基、抗纖維化和保護(hù)血管等藥理作用，但它對矽塵誘導(dǎo)的肺纖維化的防治研究中還未見報(bào)道。因此本課題將主要從 PrxsⅠ和PrxsⅥ蛋白的表達(dá)入手，應(yīng)用矽肺模型探討Prxs蛋白在矽肺發(fā)病中的作用。本研究結(jié)果將極大的豐富矽塵致肺纖維化的作用機(jī)制，并在此基礎(chǔ)上探討槲皮素的干預(yù)效果為延緩矽肺纖維化提供新的思路。
　　方法：1

3、、實(shí)驗(yàn)動物及分組：選取健康成年雄性SPF級SD大鼠60只，將其飼養(yǎng)在屏障動物實(shí)驗(yàn)室。（1）Prxs蛋白在矽肺發(fā)病中的作用：32只大鼠隨機(jī)分為四組，即對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組8只。對照組大鼠經(jīng)氣管注入無菌生理鹽水1mL；染塵組大鼠分別經(jīng)氣管注入12.5mg/mL、25mg/ml和50mg/ml二氧化硅混懸液1mL。（2）槲皮素的干預(yù)效果：將24只大鼠隨機(jī)分為對照組、染塵組和槲皮素組。染塵組和槲皮素組大鼠經(jīng)氣管注入50mg

4、/ml二氧化硅混懸液1mL，并且槲皮素組以50mg/kg的槲皮素每天灌胃干預(yù)治療。2、抗氧化酶檢測：用試劑盒檢測肺組織中過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性及 H2O2的表達(dá)含量。3、PrxsⅠ和Ⅵ蛋白的表達(dá)規(guī)律：采用蛋白免疫印跡法檢測抗氧化蛋白 PrxsⅠ和Ⅵ蛋白在肺組織中的表達(dá)水平。4、HE染色觀察大鼠肺組織肺纖維化程度，Masson染色觀察大鼠肺組織膠原纖維沉積情況，同時(shí)用試劑盒檢測羥脯氨酸(HYP)的表

5、達(dá)含量。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用-x±s表示，采用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有蛋白相對表達(dá)水平數(shù)據(jù)均除以對照組，每組的多個(gè)樣本比較采用單因素方差分析（One Way ANOVA）。
　　結(jié)果：1、大鼠矽塵染毒28天的病理結(jié)果顯示細(xì)胞性結(jié)節(jié)，提示成功建立了大鼠矽肺模型。應(yīng)用 Masson染色法進(jìn)行肺組織膠原纖維的觀察，結(jié)果表明隨著染塵劑量的增加，大鼠膠原纖維呈上升趨勢。2、不同劑量矽塵染毒對大鼠肺組織中HYP的

6、表達(dá)含量影響：隨著染塵劑量的增加 HYP的表達(dá)含量逐漸升高（P<0.05）,并且HYP的表達(dá)含量與矽塵染毒劑量呈正相關(guān)（r=0.882，P=0.028），表明大鼠肺組織纖維化程度隨著矽塵染毒劑量的增加而增加。3、不同劑量矽塵染毒對大鼠肺組織中H2O2的表達(dá)含量及抗氧化酶 CAT、GSH-PX的活性影響：（1）H2O2的表達(dá)含量：與對照組相比高劑量組、中劑量組大鼠肺組織中 H2O2表達(dá)含量分別升高了36.30％、28.73%，差異均有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義（P<0.05），表明大鼠肺組織中 H2O2的表達(dá)含量隨著矽塵染毒劑量的增加而增加。（2）CAT和GSH-Px的活性：高劑量組、中劑量組與對照組比較肺組織中 CAT活性分別降低了35.36%、21.39%，GSH-Px的活性分別降低了39.69%、16.24%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明隨著矽塵染毒劑量的增加大鼠肺組織氧化損傷程度升高。4、不同劑量染塵對大鼠肺組織中 PrxsⅠ和Ⅵ蛋白表達(dá)的影響：與對照組比較，三個(gè)矽

8、塵染毒組 PrxⅠ蛋白表達(dá)含量分別下降了12.00%、15.00%和30.00%；高劑量組與對照組、低劑量組比較肺組織中 PrxsⅥ蛋白的表達(dá)含量分別降低了18.00%、14.58%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。5、槲皮素干預(yù)對染塵大鼠肺組織中 HYP表達(dá)的影響：與對照組相比染塵組 HYP的表達(dá)含量升高了39.02%，與染塵組比較槲皮素組 HYP的表達(dá)含量降低了24.56%（P<0.05），表明在矽塵所致的肺纖維化中槲皮素的加入

9、能夠降低肺組織中HYP的表達(dá)含量。6、槲皮素的干預(yù)對染塵大鼠肺組織中H2O2的表達(dá)含量及過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活性的影響：與染塵組比較，槲皮素組 H2O2的表達(dá)含量降低了15.24%（P<0.05），表明在矽塵所致的肺纖維化中槲皮素的加入能夠降低肺組織中 H2O2的表達(dá)含量。與染塵組比較，槲皮素組CAT和GSH-Px的活性分別升高了31.31%和20.45%（P<0.05），表明在矽塵所致的肺纖維化中槲