水母蜇傷皮膚防護(hù)劑研究.pdf

1、背景和目的：隨著經(jīng)濟(jì)與社會(huì)的發(fā)展，人類(lèi)與海洋的接觸日益增多。作為最常見(jiàn)的海洋生物傷，水母蜇傷也越來(lái)越引起人們的重視。水母蜇傷可以導(dǎo)致多種局部皮膚癥狀，部分毒性較強(qiáng)的水母還可以致人死亡。而水母刺胞、毒素生物學(xué)活性等一系列問(wèn)題也并未明確。因此，開(kāi)展水母蜇傷的防治研究具有十分重要的科學(xué)和現(xiàn)實(shí)意義。水母蜇傷的防護(hù)措施除了傳統(tǒng)的防護(hù)網(wǎng)、防護(hù)衣外，目前最有發(fā)展?jié)摿Φ木褪鞘褂梅奖愕乃蛤貍つw防護(hù)劑。水母?jìng)说闹饕酒魇谴贪?，防護(hù)劑的主要研究思路便在

2、于減少、抑制刺胞發(fā)射。根據(jù)已知的刺胞發(fā)射動(dòng)力理論，刺胞內(nèi)部高濃度的金屬離子是提供刺胞發(fā)射的動(dòng)力源頭。因此，提高刺胞周?chē)h(huán)境的金屬離子濃度、減小刺胞囊壁內(nèi)外的金屬離子濃度差便有可能減少甚至是抑制刺胞發(fā)射。基于這個(gè)思路，本課題選用我國(guó)東南沿海常見(jiàn)的有毒水母一發(fā)形霞水母(Cyanea capillata)觸手制成的刺胞混懸液(nematocyst suspension，NS)作為實(shí)驗(yàn)材料，就金屬離子對(duì)刺胞發(fā)射刺絲、釋放毒素能力的影響開(kāi)展了實(shí)驗(yàn)

3、研究，以探討水母蜇傷皮膚防護(hù)劑的有效配方。
　　 水母的種類(lèi)不同，刺胞的生物學(xué)活性也不盡相同。一種皮膚防護(hù)劑的配方較難起到廣譜的防護(hù)效果。因此，建立一種操作簡(jiǎn)便、利于重復(fù)的水母蜇傷模型、開(kāi)展水母皮炎治療藥物和方法的研究也是對(duì)皮膚防護(hù)劑研究的必要補(bǔ)充和支持。因此，我們采用NS和刺胞毒素(nematocyst venom，NV)代替鮮活水母觸手，制作水母蜇傷家兔模型。利用小鼠足掌腫脹模型和建立的家兔模型，我們還對(duì)H1抗組胺藥和熱敷對(duì)

4、水母皮炎的治療效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
　　 研究方法：第一部分：將低溫冷凍(-70℃)水母觸手置于4℃人工海水中(artificialseawater，ASW)中自溶、過(guò)濾、靜置，制備得到NS。不同種類(lèi)、濃度的金屬離子溶液與NS混合，水浴震蕩，普通光學(xué)顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)刺胞發(fā)射率(nematocystdischarge rate，NDR)。以500 mmol/L檸檬酸鈉(sodium citrate，SC)溶液為陽(yáng)性對(duì)照，人工海水(ar

5、tificial seawater，ASW)為陰性對(duì)照，4℃ ASW為空白對(duì)照。
　　 不同種類(lèi)、濃度的金屬離子溶液與NS混合，水浴震蕩后離心，測(cè)量上清液蛋白濃度變化。對(duì)照選擇同上。
　　 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇抑制刺胞釋放毒素能力較強(qiáng)的金屬離子進(jìn)行組合優(yōu)化。
　　 第二部分：家兔背部脫毛。比較NS、NV通過(guò)兩種途徑(砂紙打磨破損皮膚+表面涂抹、皮內(nèi)注射)造成的皮膚損傷，采用ASW為對(duì)照。處理后1 d、2 d和3 d觀

6、察皮膚紅腫情況并評(píng)分，評(píng)分后取炎癥灶皮膚組織觀察病理學(xué)變化。
　　 小鼠分別給予氯雷他定、咪唑斯汀和鹽酸西替利嗪灌胃3 d，陽(yáng)性對(duì)照組給予生理鹽水灌胃。末次灌胃后測(cè)量小鼠右后足掌厚度。末次灌胃后2 h，右后足掌內(nèi)注射N(xiāo)V0.02 ml。注射后0.5 h起，測(cè)量足掌厚度，間隔0.5 h測(cè)量一次，直至6 h。
　　 家兔背部脫毛，皮內(nèi)注射N(xiāo)V0.1 ml(2.64 mg/m1)造成蜇傷模型。分氯雷他定灌胃、熱敷、氯雷他定灌胃

7、+熱敷以及陽(yáng)性對(duì)照4組對(duì)比觀察，分別在1 d、2 d、3 d以及14 d測(cè)量各組皮膚紅斑、結(jié)痂、壞死等炎癥灶直徑(測(cè)長(zhǎng)徑、短徑，取算術(shù)平均數(shù))。評(píng)分后，取炎癥灶皮膚觀察病理變化。
　　 結(jié)果和結(jié)論：第一部分：低溫冷凍會(huì)對(duì)刺胞活力產(chǎn)生一定的影響，但是冷凍水母觸手制成的NS可以進(jìn)行刺胞生物活性實(shí)驗(yàn)。多個(gè)種類(lèi)、濃度的金屬離子溶液對(duì)刺胞發(fā)射刺絲和釋放毒素具有不同程度的抑制作用。并且，相同濃度的金屬離子對(duì)于刺胞釋放毒素能力的抑制要強(qiáng)于對(duì)刺

8、胞發(fā)射刺絲能力的抑制。通過(guò)組合優(yōu)化，確定(500mmol/L LaCl3+25 mmol/L MgCl2+25 mmol/L CaCl2)的金屬離子配方為我們擬選用的水母蜇傷皮膚防護(hù)劑配方。
　　 第二部分：家兔背部皮膚皮內(nèi)注射N(xiāo)S或NV可以模擬水母蜇傷后的臨床癥狀和病理變化，可以代替鮮活水母觸手制作蜇傷模型。氯雷他定、鹽酸西替利嗪和咪唑斯汀可以緩解NV造成的小鼠足掌腫脹，三者之間無(wú)明顯差異?？诜壤姿軌?qū)Πl(fā)形霞水母皮炎起到