檀香油對(duì)中波紫外線引起人體皮膚光損傷的防護(hù)作用.pdf

1、皮膚是被覆于人體表面的器官，與外界環(huán)境直接接觸。皮膚具有復(fù)雜的抗氧化功能，決定氧化應(yīng)激造成的損傷程度。皮膚的自然老化及外源性刺激可以使自身的抗氧化能力下降。紫外線(ultraviolet，UV)照射是引起皮膚抗氧化能力下降的一個(gè)因素。過(guò)度的UV照射造成細(xì)胞內(nèi)活性氧基團(tuán)增加，損傷皮膚內(nèi)的脂質(zhì)、蛋白和核酸，皮膚會(huì)出現(xiàn)紅斑、水腫、增生、光老化、色素沉著、DNA損傷及免疫抑制，這些生物反應(yīng)直接或間接地導(dǎo)致皮膚腫瘤的發(fā)生。近年來(lái)，由于人們生活方式

2、的改變、戶外活動(dòng)增加以及大氣臭氧層的破壞，由UV引起的疾病不斷增多。 動(dòng)物和人體實(shí)驗(yàn)表明天然抗氧化劑如維生素C和E、大豆異黃酮、綠茶多酚、白藜蘆醇及N—乙酰半胱氨酸(N—acetylcystein，NAC)等能調(diào)節(jié)這些事件的啟動(dòng)和進(jìn)展，減輕UV引起的皮膚損傷。這些提示在護(hù)膚品中或飲食中加入抗氧化劑可能阻止UV引起的皮膚炎癥、老化，抑制腫瘤發(fā)生。但是，有些抗氧化劑如維生素C和E很不穩(wěn)定，而有些如NAC要很高濃度才能起作用，而且，每

3、種抗氧化劑都不能完全消除UV引起的光損傷。所以，有必要探索新的抗氧化劑，以增強(qiáng)抗光損傷的功效。 檀香油(sandalwood oil)又名東印度檀香油，由檀香科植物白檀的木片或根、枝經(jīng)水蒸氣蒸餾所得。檀香油用于治療炎癥性皮膚病及皮膚護(hù)理已有數(shù)千年的歷史。外用檀香油具有很強(qiáng)的殺菌效果，能抑制痤瘡丙酸桿菌、皮膚癬菌的生長(zhǎng)，抑制單純皰疹病毒1型復(fù)制，并且對(duì)宿主細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒作用。它能刺激細(xì)胞的更新，有助于瘢痕、傷口、皺紋、痤瘡以及其他皮

4、膚病的愈合。因其療效卓著，被稱(chēng)作“液體黃金”。檀香油能清除活性氧基團(tuán)，有很強(qiáng)的抗氧化作用。 Dwivedi等報(bào)道檀香油及其主要成分α—檀香醇涂抹小鼠皮膚后，能顯著抑制化學(xué)致癌劑致皮膚腫瘤的啟動(dòng)和促進(jìn)，減少腫瘤的數(shù)目。Α—檀香醇亦能誘導(dǎo)人類(lèi)表皮樣細(xì)胞癌A431細(xì)胞凋亡。我們預(yù)期人體皮膚局部涂抹檀香油可以減輕UV照射引起的皮膚光損傷。但目前人體應(yīng)用檀香油的有效性及安全性尚無(wú)報(bào)道。 本研究的目的是通過(guò)在人體皮肽UVB照射前、

5、后涂抹檀香油，比較出現(xiàn)紅斑和不適反應(yīng)程度、表皮內(nèi)日曬傷細(xì)胞數(shù)目，分析基質(zhì)金屬蛋白酶—1(matrix metalloproteinase，MMP—1)和MMP—9、白介素—10(interleukin—10，IL-10)和表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞(Langerhans cells，LCs)數(shù)目及p53的表達(dá)等指標(biāo)，來(lái)探討局部涂抹檀香油對(duì)UVB引起的人體皮膚曬傷、光老化、光免疫抑制及光致癌性有無(wú)防護(hù)作用。 方法： 1、志愿者：

6、 30名健康女性(年齡42～50歲，F(xiàn)itzpatrick皮膚類(lèi)型Ⅲ～Ⅳ型)，未患與光線有關(guān)的皮膚病，沒(méi)有系統(tǒng)疾??；試驗(yàn)部位沒(méi)有皮膚?。?個(gè)月內(nèi)及實(shí)驗(yàn)過(guò)程中沒(méi)有用藥(包括非處方藥)。簽署知情同意書(shū)。其中15名取皮膚活檢。 2、最小紅斑量(minimal erythema dose，MED)測(cè)定 實(shí)驗(yàn)前測(cè)定每個(gè)志愿者的MED。在背部或臀部選擇8個(gè)部位，分別以不同劑量UVB照射，以出現(xiàn)紅斑的最小UVB劑量作為MED。

7、 3、UVB照射及檀香油涂抹： 選擇背部作為照射區(qū)域。UVB照射劑量為1.5—MED。分別于照射UVB前1小時(shí)或照射后5分鐘涂抹1％檀香油、5％檀香油(溶于基質(zhì)3：2的丙二醇：乙醇中)或基質(zhì)；僅照射UVB、僅涂抹5％檀香油及不涂抹檀香油也不照射UVB作為對(duì)照。每個(gè)部位涂抹50μl檀香油溶液。照射UVB前將溶液輕輕擦去。 4、紅斑程度： 紅斑程度分級(jí)：0：無(wú)紅斑：1：淡紅斑：2：明顯紅斑；3：顯著紅斑或有浸潤(rùn)

8、。照射后24小時(shí)由2名醫(yī)生獨(dú)立評(píng)估、照相。 5、測(cè)定紅斑指數(shù)(erythema index，EI)： 分別于照射前、照射后24小時(shí)及7天后測(cè)定各部位的紅斑指數(shù)，每個(gè)部位測(cè)5個(gè)點(diǎn)，取平均值作為該點(diǎn)的EI0、EI24h、EI7d。 6、不適指數(shù)： 采用5分法進(jìn)行評(píng)分：正常皮膚感覺(jué)—1；輕度瘙癢—2；明顯瘙癢—3：輕度疼痛—4；明顯疼痛—5。 7、皮膚活檢： 15例志愿者照射后24小時(shí)實(shí)驗(yàn)區(qū)域取

9、皮膚活檢，每塊分成3～4份：分別福爾馬林固定后石蠟包埋、OCT包埋—70℃凍存、立即浸于液氮中數(shù)秒后—70℃凍存、EDTA中浸泡4℃過(guò)夜后分離表皮。 8、石蠟切片蘇木素—伊紅(hematoxylin—eosin，HE)染色： 4μm厚石蠟切片貼于掛有多聚賴(lài)氨酸的載玻片上，HE染色。顯微鏡下觀察表皮內(nèi)日曬傷細(xì)胞，照相，計(jì)數(shù)400倍鏡下5個(gè)視野內(nèi)日曬傷細(xì)胞數(shù)目。計(jì)算15例志愿者的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。 9、免疫組化：所有抗

10、體都是小鼠抗人單克隆抗體 (1)冰凍切片中MMP—1、MMP—9：抗體1：50稀釋。 (2)石蠟切片中p53表達(dá)：抗體1:100稀釋。 (3)新鮮表皮片中CD1a表達(dá)：解剖顯微鏡下分離表皮，置于Eppendorf管中與抗體反應(yīng)。 10、熒光Real-Time定量RT-PCR檢測(cè)皮膚活檢中MMP—1、MMP—9 mRNA水平 —70℃凍存的組織塊切片后應(yīng)用RNAiso試劑盒提取總RNA，應(yīng)用紫外分光

11、光度計(jì)測(cè)定濃度和純度，反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA，熒光real-Time quantitative PCR擴(kuò)增。根據(jù)RNA濃度，反轉(zhuǎn)錄體系中加入的RNA模板量調(diào)至相同，以使得到的cDNA量一致。根據(jù)各樣本內(nèi)參照β—actin，對(duì)mRNA進(jìn)行半定量分析。 11、RT-PCR檢測(cè)皮膚活檢中IL-10 mRNA水平 —70℃凍存的組織塊切片后應(yīng)用RNAiso試劑盒提取總RNA，測(cè)定濃度和純度。根據(jù)RNA濃度，反轉(zhuǎn)錄體系中加入的RNA

12、模板量調(diào)至相同，以使得到的cDNA量一致。PCR擴(kuò)增后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。用Labworks4.0軟件分析電泳條帶，以IL-10與內(nèi)參照GAPDH條帶的密度比值表示IL-10 mRNA相對(duì)量。 12、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析： 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行ANOVA方差分析，以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1、人體皮膚涂抹檀香油可以減輕UVB照射引起的皮膚紅斑與不適，減少表皮內(nèi)日曬傷細(xì)胞的形成。人體皮膚涂抹

13、檀香油沒(méi)有刺激性及過(guò)敏反應(yīng)，安全性好。 2、人體皮膚涂抹5％檀香油能抑制UVB照射引起的MMP—1和MMP—9mRNA及蛋白表達(dá)的升高，從而抑制光老化。 3、人體皮膚照射UVB引起表皮內(nèi)LCs數(shù)目減少及IL-10 mRNA水平升高，局部涂抹檀香油能保護(hù)表皮內(nèi)的LCs，抑制IL-10水平升高，從而保護(hù)皮膚正常的免疫功能。 4、人體皮膚局部涂抹檀香油能夠抑制UVB引起的p53表達(dá)，在人體皮膚中具有抗光致癌的作用。