心肌梗死后大鼠左心室肌細胞鉀通道的改變及夾竹桃麻素的干預作用研究.pdf

1、目的：探討心肌梗死后大鼠左心室肌細胞鉀通道的改變及夾竹桃麻素的干預作用。
　　方法:
　　1.選擇體重230～260g健康雄性SD（Sprague Dawley）大鼠共90只，稱重后用10%水合氯醛腹腔注射麻醉并行氣管插管，開胸結扎左冠狀動脈前降支建立心肌梗死模型，假手術組（sham組）僅將縫線穿過前降支而不結扎。將心肌梗死大鼠隨機分為2個亞組，一組接受夾竹桃麻素（15mg/kg/d）灌胃給藥5周，設為心梗干預組（MI干預組

2、），另一組給予等體積生理鹽水灌胃5周，設為心肌梗死組（MI組）。第6周時存活并用于實驗的大鼠共32只，將一部分大鼠稱重后行腹腔麻醉，迅速開胸取出心臟，應用酶解法分離獲得單個左心室肌細胞用于膜片鉗實驗，其中sham組5只，MI組6只，MI干預組6只，另一部分大鼠稱取左心室重量并取左心室非梗死區(qū)心肌組織，用于測定基因表達，每組各5只。
　　2.采用酶解法分離獲得單個左心室肌細胞，應用膜片鉗全細胞記錄技術記錄三組大鼠左心室肌細胞膜電容（

3、Cm）和瞬時外向鉀流（Ito）、穩(wěn)態(tài)外向鉀流（Iss）及內向整流性鉀流（Ik1），測定每一鉗制電壓下的電流幅值并計算每一鉗制電壓下的電流密度，將每一鉗制電壓下的最大電流密度繪制成電流密度-電壓（I-V）曲線，并計算Ito的激活、失活時間常數(shù)。
　　3.采用實時熒光定量聚合酶鏈反應法(RT-qPCR)檢測左心室肌細胞Ito通道α亞單位編碼基因Kv4.2 mRNA表達量。
　　結果:
　　1.MI組大鼠（n=5）左室質量指

4、數(shù)為（3.19±0.25）mg/g，sham組（n=5）為（2.61±0.32）mg/g，兩組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；MI干預組（n=5）為（2.72±0.22）mg/g，較MI組顯著降低（P＜0.01），與sham組間無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。sham組、MI組及MI干預組間左心室重量、體重比較均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　2.Sham組左心室肌細胞膜電容為（189.91±26.5）pF（n=12），MI

5、組為（248.54±28.13）pF（n=8），二組間比較差異顯著（P<0.01）；MI干預組為（203.68±19.33）pF（n=9），顯著低于MI組（P<0.01），雖然高于sham組，但無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　3.Ito：+60mV鉗制電壓時，MI組電流密度顯著低于sham組，分別為（15.55±1.63）pA/pF（n=8）和（28.36±2.26）pA/pF（n=12）（P<0.01）；MI干預組為（23.

6、72±2.55）pA/pF（n=9），較MI組電流密度顯著增加（P<0.01），比sham組電流密度顯著降低（P<0.01）。三組Ito的激活電壓均為-30mv，激活時間常數(shù)分別為（1.41±0.52）ms、（1.57±0.34）ms和（1.21±0.32）ms，失活時間常數(shù)分別為（17.82±4.33）ms、（20.54±2.95）ms和（19.12±4.58）ms，均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　4.Iss：三組心肌細胞

7、Iss在+60mv下電流密度分別為sham組（8.45±0.68）pA/pF（n=12），MI組（8.38±0.45）pA/pF（n=8），MI干預組（9.05±0.32）pA/pF（n=9），三組間均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。三組Iss的I-V曲線顯示，在不同鉗制電壓下其電流密度相當。
　　5.Ik1：-120mv鉗制電壓下三組的電流密度分別為sham組（16.29±1.18）pA/pF（n=12），MI組為（16.87±0

8、.65）pA/pF（n=8），MI干預組為（17.34±0.72）pA/pF（n=9），三組間均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。在各鉗制電壓下三組I-V曲線幾乎重疊。
　　6.sham組Kv4.2 mRNA的表達水平是MI組的（5.35±0.53）倍，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），是MI干預組的（1.47±0.14）倍，差異亦有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而MI干預組Kv4.2 mRNA的表達水平則是MI組的（2.82±0.47

9、）倍，有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。
　　結論：
　　1.MI組大鼠左心室質量指數(shù)及非梗死區(qū)心肌細胞膜電容均較sham組明顯增高，應用夾竹桃麻素干預后上述指標均顯著下降，表明抑制NADPH氧化酶可減輕心肌梗死后大鼠左心室肌細胞肥大。
　　2.MI組大鼠非梗死區(qū)心肌細胞Ito電流密度較對照組顯著降低，I-V曲線明顯下移，同時編碼Ito通道α亞單位的Kv4.2 mRNA表達水平較sham組顯著降低，提示Ito電流密度降低系