趨化因子CCL28在缺氧誘導肝癌細胞遷移侵襲中的作用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景與目的:肝細胞肝癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,在我國居惡性腫瘤死亡率第二位。轉(zhuǎn)移一直是影響肝癌預后的重要因素。肝癌細胞獲得侵襲轉(zhuǎn)移能力,與其所在的腫瘤微環(huán)境是密切相關(guān)的。缺氧是實體腫瘤發(fā)展過程中的常見現(xiàn)象之一。研究認為缺氧微環(huán)境可以誘導腫瘤細胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、生成新生血管和促進腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。趨化因子是一族分子量為8-14kDa大小的趨化作用的細胞因子,通過與其相應(yīng)受體結(jié)合,發(fā)揮調(diào)節(jié)白細胞趨化到炎癥部位的作用。近來不斷有研究證實

2、趨化因子及其受體在腫瘤的生長,侵襲,血管生成和轉(zhuǎn)移中起到重要的作用。已有研究報道CCL2和CCR2與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān),但是其他趨化因子在腫瘤發(fā)展中的作用仍知之甚少。本研究著重于探索CCL28在缺氧誘導的人肝癌轉(zhuǎn)移過程中作用。
  方法:應(yīng)用實時定量PCR檢測50例肝細胞癌組織中CCL28和HIF-1αmRNA表達情況并分析兩者表達的相關(guān)性,運用卡方檢驗,Kaplan-Meier分析HIF-1α及CCL28表達與年齡、性別、乙肝病毒標記

3、物、肝硬化、分化、包膜、甲胎蛋白等臨床病例特征及患者總體生存時間的關(guān)系;同時在體外細胞實驗中,采用實時定量PCR,Western blot與酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測缺氧對肝癌細胞株HepG2、HCCLM3 HIF-1α和CCL28表達的影響;運用RNA干擾(siRNA)和Lipofectamine2000細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)下調(diào)HIF-1α基因表達對肝細胞癌HCCLM3細胞CCL28蛋白表達的影響。通過抑制CCL28表達,結(jié)合Tran

4、swell和BDMatrigel觀察CCL28在缺氧誘導的肝癌細胞侵襲遷移中的作用;采用明膠酶譜法測定CCL28-siRNA干擾后細胞上清的金屬蛋白酶含量的差異。
  結(jié)果:1)實時定量PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)癌組織中HIF-1αmRNA含量0.0654±0.0988,29/50(58%)例呈高表達。CCL28mRNA水平在肝癌組織為0.0254±0.0755,23/50(46%)例呈高表達。Spearman雙變量相關(guān)性分析顯示肝細胞癌組織

5、中CCL28與HIF-1α mRNA水平呈高度相關(guān)(r=0.595,p<0.001);二者表達水平增高皆與術(shù)后復發(fā)相關(guān)。
  2)體外細胞實驗顯示肝癌HepG2和HCCLM3細胞HIF-1α和CCL28mRNA水平在缺氧(1%O2)培養(yǎng)6h后開始增加,二者的蛋白表達水平在缺氧培養(yǎng)12h后開始增高,并呈現(xiàn)出時間依賴性。利用HIF-1α特異性siRNA阻斷HIF-1α的表達后,CCL28蛋白的表達水平則隨著HIF-1α表達抑制而減少;

6、
  3)利用siRNA抑制HCCLM3細胞內(nèi)CCL28表達,經(jīng)實時定量PCR和ELISA證實mRNA和蛋白水平明顯降低。研究發(fā)現(xiàn)干擾HCCLM3細胞內(nèi)CCL28表達后,缺氧條件下遷移和穿膜細胞數(shù)目較空白組減少,細胞MMP-2的分泌也減少。
  結(jié)論:1)HIF-1α和CCL28在肝癌組織中mRNA表達增高,且表達水平呈高度相關(guān)性。二者表達水平增高皆與術(shù)后復發(fā)相關(guān)。
  2)缺氧可通過HIF-1α上調(diào)肝癌細胞CCL28

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