4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯誘導五種實體腫瘤細胞分化及其對維甲酸受體RARs和RXRs表達的影響.pdf

1、目的:本研究觀察新型維甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate, ATPR)對食管癌細胞株ECA-109、胃癌細胞株MGC80-3、胰腺癌細胞株PANC-1、宮頸癌細胞株HeLa及神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y增殖的影響和誘導分化的活性,并探討其作用的分子機制。
　　方法:
　　1.新型維甲酸類衍生物ATPR(10-4、10-5、10-6、1

2、0-7、10-8、10-9mol/L)作用于腫瘤細胞株ECA-109、MGC80-3、PANC-1、HeLa、SH-SY5Y細胞后,通過MTT法檢測細胞的增殖情況;瑞氏吉姆薩染色法在倒置相差顯微鏡下觀察加藥處理前后細胞形態(tài)學變化;分光光度法檢測胃癌細胞分化標志酶ALP、LDH活性,酶聯(lián)免疫法檢測食管癌細胞分化標志酶鱗狀上皮癌相關抗原(SCC-Ag)活性、胰腺癌標志物糖鏈抗原199(CA199)和宮頸癌標志物糖鏈抗原125(CA125)活

3、性,免疫細胞化學法檢測神經(jīng)母細胞瘤分化標志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)活性;流式細胞儀測定細胞周期的變化。
　　2.選擇MGC80-3、SH-SY5Y細胞為實驗對象,設空白對照組(加入等體積的DMEM)、溶劑對照組(含0.05％無水乙醇)、陽性對照組ATRA(10-5 mol/L)及實驗組ATPR(10-5mol/L),采用RT-PCR技術檢測ATPR用藥72h后引起的細胞中維甲酸受體RARα,RARβ,RARγ,RXRα,R

4、XRβ,RXRγmRNA表達的變化。3.為進一步觀察ATPR對RARs和RXRs影響的時效學變化,采用RT-PCR法檢測ATPR(10-5mol/L)分別用藥0、1、3、5、7d后MGC80-3、SH-SY5Y細胞中維甲酸受體RARα,RARβ,RARγ,RXRα,RXRβ,RXRγ轉(zhuǎn)錄水平的變化情況。
　　結果:
　　1.ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)體外用藥可抑制食管癌細

5、胞株ECA-109、胃癌細胞株MGC80-3、胰腺癌細胞株PANC-1、宮頸癌細胞株HeLa及神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y的增殖,且隨著劑量的增加,抑制效應增強,抑制作用于藥物作用48h后出現(xiàn),72h后達峰值。ATPR濃度為10-4 mol/L時,藥物對細胞增殖的抑制效率明顯高于其他劑量組,且鏡下觀察發(fā)現(xiàn)5種細胞株均出現(xiàn)皺縮、凋亡。瑞氏吉姆薩染色結果顯示ATPR(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)體外用藥可誘

6、導上述實體腫瘤細胞形態(tài)趨于成熟分化。與對照組比較,ATPR用藥組ECA-109細胞分泌SCC-Ag活性下降(P<0.05)、MGC80-3細胞中ALP、LDH減少(P<0.05)、HeLa細胞CA125濃度下降(P<0.05)、SH-SY5Y細胞NSE水平上升(P<0.05)。而ATPR用藥組PANC-1細胞分泌CA199水平有下降趨勢,但與空白對照組比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05);流式細胞儀結果顯示ATPR(10-5、10-6、10

7、-7、10-8、10-9mol/L)用藥后各腫瘤細胞G0/G1期細胞表達量增加,S期減少,細胞周期進程受影響,細胞阻滯在G0/G1期。
　　2.ATPR(10-5 mol/L)、ATRA(10-5 mol/L)作用72h后,與空白對照組相比,MGC80-3中RARα、RARβ表達量升高,RARγ,RXRα,RXRβ,RXRγ表達量無明顯變化;SH-SY5Y中RARα、RARβ表達量升高,RXRα表達量下降,而RARγ,RXRβ,

8、RXRγ表達量無明顯變化。
　　3.ATPR(10-5 mol/L)用藥0、1、3、5、7d后,MGC80-3中RARα、RARβ、RXRγ表達量升高,RARγ,RXRα,RXRβ表達量無明顯變化;SH-SY5Y中 RARα、RARβ表達量升高,RXRα表達量下降,RARγ,RXRβ,RXRγ表達量無明顯變化。
　　結論:
　　1.4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10

9、-8、10-9mol/L)可抑制食管癌細胞株ECA-109、胃癌細胞株MGC80-3、宮頸癌細胞株HeLa及神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞的增殖并誘導其分化;4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)可抑制胰腺癌細胞株PANC-1增殖,但誘導分化活性有待于進一步研究。
　　2.維甲酸受體RARα、RARβ、RXRγ可能與ATPR對胃癌細胞株MGC80-3的生長